中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2001年
8期
745
,共1页
目的和方法:吸烟是慢性阻塞性肺疾患、动脉粥样硬化等多种疾病的主要危险因素之一,但吸烟促使这些疾病发生的详细机制尚未完全明了.本文探讨作为香烟烟雾中主要成分的尼古丁对白细胞活化及白细胞与内皮细胞粘附的作用,并观察764-3(中药丹参提取物)对其影响,有助于阐明尼古丁在炎症性疾病发病中的作用并为寻找有效的防治炎症损伤的措施提供新的思路.结果:1.利用体外原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为靶细胞,首先观察到尼古丁促进中性粒细胞与内皮细胞粘附;2.用流式细胞术和Northern印迹杂交法分别观察到尼古丁可促进内皮细胞表面ICAM-1蛋白和mRNA表达,且呈时间和剂量依赖的趋势;3.用分子克隆技术成功地构建了4种含人ICAM-1基因不同长度的启动子序列和两种含顺式作用元件发生定点突变序列的荧光素酶报告基因质粒;4.用真核细胞转染技术证实尼古丁诱导ICAM-1基因表达依赖于其启动子中-230 bp和-134 bp之间的序列,且可能与此区域中的NF-κB结合位点有关;5.探讨了尼古丁的作用与细胞内信号转导机制之间的关系.观察到尼古丁可促使内皮细胞胞内游离钙离子浓度的增加(激光共聚焦显微镜法)、PKC活化(γ-32P-ATP掺入法)及Ras蛋白的活化(GST-RBD沉淀和Western印迹杂交法);6.观察到764-3可分别抑制尼古丁诱导的中性粒细胞与内皮细胞的粘附增加、内皮细胞ICAM-1蛋白和mRNA表达增加、内皮细胞胞浆游离钙离子浓度的增加以及PKC的活化.结论: 尼古丁可能通过作用于ICAM-1启动子区下游NF-κB位点,诱导ICAM-1基因表达,在尼古丁所致的炎症性疾病发病中起重要作用;764-3拮抗尼古丁的作用提示其在吸烟所致炎症性疾病的防治中可能具有潜在的意义.
目的和方法:吸煙是慢性阻塞性肺疾患、動脈粥樣硬化等多種疾病的主要危險因素之一,但吸煙促使這些疾病髮生的詳細機製尚未完全明瞭.本文探討作為香煙煙霧中主要成分的尼古丁對白細胞活化及白細胞與內皮細胞粘附的作用,併觀察764-3(中藥丹參提取物)對其影響,有助于闡明尼古丁在炎癥性疾病髮病中的作用併為尋找有效的防治炎癥損傷的措施提供新的思路.結果:1.利用體外原代培養的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)為靶細胞,首先觀察到尼古丁促進中性粒細胞與內皮細胞粘附;2.用流式細胞術和Northern印跡雜交法分彆觀察到尼古丁可促進內皮細胞錶麵ICAM-1蛋白和mRNA錶達,且呈時間和劑量依賴的趨勢;3.用分子剋隆技術成功地構建瞭4種含人ICAM-1基因不同長度的啟動子序列和兩種含順式作用元件髮生定點突變序列的熒光素酶報告基因質粒;4.用真覈細胞轉染技術證實尼古丁誘導ICAM-1基因錶達依賴于其啟動子中-230 bp和-134 bp之間的序列,且可能與此區域中的NF-κB結閤位點有關;5.探討瞭尼古丁的作用與細胞內信號轉導機製之間的關繫.觀察到尼古丁可促使內皮細胞胞內遊離鈣離子濃度的增加(激光共聚焦顯微鏡法)、PKC活化(γ-32P-ATP摻入法)及Ras蛋白的活化(GST-RBD沉澱和Western印跡雜交法);6.觀察到764-3可分彆抑製尼古丁誘導的中性粒細胞與內皮細胞的粘附增加、內皮細胞ICAM-1蛋白和mRNA錶達增加、內皮細胞胞漿遊離鈣離子濃度的增加以及PKC的活化.結論: 尼古丁可能通過作用于ICAM-1啟動子區下遊NF-κB位點,誘導ICAM-1基因錶達,在尼古丁所緻的炎癥性疾病髮病中起重要作用;764-3拮抗尼古丁的作用提示其在吸煙所緻炎癥性疾病的防治中可能具有潛在的意義.
목적화방법:흡연시만성조새성폐질환、동맥죽양경화등다충질병적주요위험인소지일,단흡연촉사저사질병발생적상세궤제상미완전명료.본문탐토작위향연연무중주요성분적니고정대백세포활화급백세포여내피세포점부적작용,병관찰764-3(중약단삼제취물)대기영향,유조우천명니고정재염증성질병발병중적작용병위심조유효적방치염증손상적조시제공신적사로.결과:1.이용체외원대배양적인제정맥내피세포(HUVEC)위파세포,수선관찰도니고정촉진중성립세포여내피세포점부;2.용류식세포술화Northern인적잡교법분별관찰도니고정가촉진내피세포표면ICAM-1단백화mRNA표체,차정시간화제량의뢰적추세;3.용분자극륭기술성공지구건료4충함인ICAM-1기인불동장도적계동자서렬화량충함순식작용원건발생정점돌변서렬적형광소매보고기인질립;4.용진핵세포전염기술증실니고정유도ICAM-1기인표체의뢰우기계동자중-230 bp화-134 bp지간적서렬,차가능여차구역중적NF-κB결합위점유관;5.탐토료니고정적작용여세포내신호전도궤제지간적관계.관찰도니고정가촉사내피세포포내유리개리자농도적증가(격광공취초현미경법)、PKC활화(γ-32P-ATP참입법)급Ras단백적활화(GST-RBD침정화Western인적잡교법);6.관찰도764-3가분별억제니고정유도적중성립세포여내피세포적점부증가、내피세포ICAM-1단백화mRNA표체증가、내피세포포장유리개리자농도적증가이급PKC적활화.결론: 니고정가능통과작용우ICAM-1계동자구하유NF-κB위점,유도ICAM-1기인표체,재니고정소치적염증성질병발병중기중요작용;764-3길항니고정적작용제시기재흡연소치염증성질병적방치중가능구유잠재적의의.
