CAJ | 학술논문

目的构建以融合蛋白形式在大肠杆菌中高效表达心钠素的重组质粒,稳定高效地获得基因工程产品心钠素.方法采用PCR和亚克隆技术构建带有心钠素的融合基因并在大肠杆菌中高效表达融合蛋白,利用操纵子重复克隆提高表达量,以凝血酶切割融合蛋白释放心钠素小肽并通过柱层析纯化蛋白质,检定产品的各项理化指标和大鼠的体内降压、体内利尿和体外舒张血管等药理活性.结果构建了4个高效表达的心钠素融合蛋白的质粒,分别含1～4个目的基因串联操纵子;通过温度诱导表达后,该系列表达的目的蛋白分别为菌体总蛋白的46%、54.8%、56.1%和60.1%;提取纯化包涵体形式的融合蛋白后,以凝血酶切割释放心钠素,再经纯化分离出心钠素;实验室摇瓶发酵每升培养液可获得3 mg以上的纯度大于96%的产品,产品具有利尿、降压和舒张血管的药理活性.结论利用融合基因的克隆与表达成功地研制了人心钠素基因工程产品.
목적구건이융합단백형식재대장간균중고효표체심납소적중조질립,은정고효지획득기인공정산품심납소.방법채용PCR화아극륭기술구건대유심납소적융합기인병재대장간균중고효표체융합단백,이용조종자중복극륭제고표체량,이응혈매절할융합단백석방심납소소태병통과주층석순화단백질,검정산품적각항이화지표화대서적체내강압、체내이뇨화체외서장혈관등약리활성.결과구건료4개고효표체적심납소융합단백적질립,분별함1～4개목적기인천련조종자;통과온도유도표체후,해계렬표체적목적단백분별위균체총단백적46%、54.8%、56.1%화60.1%;제취순화포함체형식적융합단백후,이응혈매절할석방심납소,재경순화분리출심납소;실험실요병발효매승배양액가획득3 mg이상적순도대우96%적산품,산품구유이뇨、강압화서장혈관적약리활성.결론이용융합기인적극륭여표체성공지연제료인심납소기인공정산품.