CAJ | 학술논문

地衣芽孢杆菌菌株GXN151的cel12A基因为783 bp,可编码含261个氨基酸的羧甲基纤维素酶Cel12A,Cel12A的N-末端第1～28氨基酸具典型的信号肽特征、第9～31氨基酸具跨膜功能域特征、第104～261氨基酸形成家族12糖基水解酶(glycosyl hydrolase)功能域.将编码其第73～261氨基酸的DNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)得表达质粒pGXN12A,用1 mmol/L IPTG诱导处理JM109(DE3)/pGXN12A 的培养液6 h pGXN12A的表达量达到最高,在JM109(DE3)和BL21(DE3)pLysS中该表达蛋白质可分别占菌体胞内总蛋白的54.3%和20.9%.在含羧甲基纤维素的LA平板上JM109(DE3)/pGXN12A和BL21(DE3)pLysS/pGXN12A表现有较弱的羧甲基纤维素酶活性,说明重组的Cel12A的催化功能域具有独立的催化活性.包含体检测表明pGXN12A在JM109(DE3)中的表达产物大部分形成不溶性包含体.
지의아포간균균주GXN151적cel12A기인위783 bp,가편마함261개안기산적최갑기섬유소매Cel12A,Cel12A적N-말단제1～28안기산구전형적신호태특정、제9～31안기산구과막공능역특정、제104～261안기산형성가족12당기수해매(glycosyl hydrolase)공능역.장편마기제73～261안기산적DNA서렬극륭도대장간균표체재체pET-30a(+)득표체질립pGXN12A,용1 mmol/L IPTG유도처리JM109(DE3)/pGXN12A 적배양액6 h pGXN12A적표체량체도최고,재JM109(DE3)화BL21(DE3)pLysS중해표체단백질가분별점균체포내총단백적54.3%화20.9%.재함최갑기섬유소적LA평판상JM109(DE3)/pGXN12A화BL21(DE3)pLysS/pGXN12A표현유교약적최갑기섬유소매활성,설명중조적Cel12A적최화공능역구유독립적최화활성.포함체검측표명pGXN12A재JM109(DE3)중적표체산물대부분형성불용성포함체.