微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
3期
382-386
,共5页
宋水山%马宏%高振贤%贾振华%张霞
宋水山%馬宏%高振賢%賈振華%張霞
송수산%마굉%고진현%가진화%장하
聚羟基烷酸%聚-4羟基丁酸%代谢工程%重组大肠杆菌
聚羥基烷痠%聚-4羥基丁痠%代謝工程%重組大腸桿菌
취간기완산%취-4간기정산%대사공정%중조대장간균
为实现重组大肠杆菌以葡萄糖为唯一碳源合成均聚的P(4HB),PCR扩增大肠杆菌编码谷氨酸:琥珀酰半缩醛转氨基酶基因(gabT),谷氨酸脱羧酶基因(gadA)以及富养罗尔斯通氏菌(Ralstonia eutropha)H16的4-羟基丁酸脱氢酶基因(gadB),并组装到携带富养罗尔斯通氏菌(Ralstonia eutropha)H16的PHA聚合酶基因(phaC)和克氏梭菌(Clostridium kluyveri)中编码4-羟基丁酸:CoA转移酶基因(orfZ)的重组质粒pKESS5.3上,形成一个大的操纵元.携带重组质粒的大肠杆菌获得从三羧酸循环的中间物--α-酮戊二酸到P(4HB)的代谢途径.结果表明,重组大肠杆菌可以以葡萄糖为唯一碳源合成均聚的P(4HB),当向以葡萄糖为唯一碳源的无机培养基添加蛋白胨、酵母提取物、酪蛋白水解物时,P(4HB)的含量可以高达菌体干重的30%.
為實現重組大腸桿菌以葡萄糖為唯一碳源閤成均聚的P(4HB),PCR擴增大腸桿菌編碼穀氨痠:琥珀酰半縮醛轉氨基酶基因(gabT),穀氨痠脫羧酶基因(gadA)以及富養囉爾斯通氏菌(Ralstonia eutropha)H16的4-羥基丁痠脫氫酶基因(gadB),併組裝到攜帶富養囉爾斯通氏菌(Ralstonia eutropha)H16的PHA聚閤酶基因(phaC)和剋氏梭菌(Clostridium kluyveri)中編碼4-羥基丁痠:CoA轉移酶基因(orfZ)的重組質粒pKESS5.3上,形成一箇大的操縱元.攜帶重組質粒的大腸桿菌穫得從三羧痠循環的中間物--α-酮戊二痠到P(4HB)的代謝途徑.結果錶明,重組大腸桿菌可以以葡萄糖為唯一碳源閤成均聚的P(4HB),噹嚮以葡萄糖為唯一碳源的無機培養基添加蛋白胨、酵母提取物、酪蛋白水解物時,P(4HB)的含量可以高達菌體榦重的30%.
위실현중조대장간균이포도당위유일탄원합성균취적P(4HB),PCR확증대장간균편마곡안산:호박선반축철전안기매기인(gabT),곡안산탈최매기인(gadA)이급부양라이사통씨균(Ralstonia eutropha)H16적4-간기정산탈경매기인(gadB),병조장도휴대부양라이사통씨균(Ralstonia eutropha)H16적PHA취합매기인(phaC)화극씨사균(Clostridium kluyveri)중편마4-간기정산:CoA전이매기인(orfZ)적중조질립pKESS5.3상,형성일개대적조종원.휴대중조질립적대장간균획득종삼최산순배적중간물--α-동무이산도P(4HB)적대사도경.결과표명,중조대장간균가이이포도당위유일탄원합성균취적P(4HB),당향이포도당위유일탄원적무궤배양기첨가단백동、효모제취물、락단백수해물시,P(4HB)적함량가이고체균체간중적30%.
