中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2007年
4期
579-583
,共5页
胚胎细胞系%漠斑牙鲆%核型%GFP报告基因
胚胎細胞繫%漠斑牙鲆%覈型%GFP報告基因
배태세포계%막반아평%핵형%GFP보고기인
漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)是中国近年新开发的重要海水养殖鱼类,本研究以漠斑牙鲆囊胚期胚胎为材料,探索了鱼类胚胎细胞分离和培养的条件,建立了漠斑牙鲆胚胎细胞培养技术.建立的漠斑牙鲆胚胎细胞系(SFEC)至今已经培养了240多天,传至80多代.SFEC的完全培养基采用添加抗生素、胎牛血清(FBS)、花鲈血清(SPS)、成纤维生长因子(bFGF)的DMEM.SFEC形态小而呈圆形、多边形,在培养基中生长迅速.本实验检测了温度、胎牛血清浓度、成纤维生长因子对SFEC生长的影响.在24～30℃之间SFEC生长良好,但当温度低于18℃时细胞生长速度明显减慢.在含15% FBS的培养基中,SFEC生长速度明显比在含7.5% FBS的培养基中快,在培养基中添加bFGF可以使细胞生长速度显著提高.SFEC的二倍体核型为2n=6st+42t.将GFP报告基因通过脂质体介导的方法转入SFEC中并成功地获得了表达,转化率为20%.
漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)是中國近年新開髮的重要海水養殖魚類,本研究以漠斑牙鲆囊胚期胚胎為材料,探索瞭魚類胚胎細胞分離和培養的條件,建立瞭漠斑牙鲆胚胎細胞培養技術.建立的漠斑牙鲆胚胎細胞繫(SFEC)至今已經培養瞭240多天,傳至80多代.SFEC的完全培養基採用添加抗生素、胎牛血清(FBS)、花鱸血清(SPS)、成纖維生長因子(bFGF)的DMEM.SFEC形態小而呈圓形、多邊形,在培養基中生長迅速.本實驗檢測瞭溫度、胎牛血清濃度、成纖維生長因子對SFEC生長的影響.在24～30℃之間SFEC生長良好,但噹溫度低于18℃時細胞生長速度明顯減慢.在含15% FBS的培養基中,SFEC生長速度明顯比在含7.5% FBS的培養基中快,在培養基中添加bFGF可以使細胞生長速度顯著提高.SFEC的二倍體覈型為2n=6st+42t.將GFP報告基因通過脂質體介導的方法轉入SFEC中併成功地穫得瞭錶達,轉化率為20%.
막반아평(Paralichthys lethostigma)시중국근년신개발적중요해수양식어류,본연구이막반아평낭배기배태위재료,탐색료어류배태세포분리화배양적조건,건립료막반아평배태세포배양기술.건립적막반아평배태세포계(SFEC)지금이경배양료240다천,전지80다대.SFEC적완전배양기채용첨가항생소、태우혈청(FBS)、화로혈청(SPS)、성섬유생장인자(bFGF)적DMEM.SFEC형태소이정원형、다변형,재배양기중생장신속.본실험검측료온도、태우혈청농도、성섬유생장인자대SFEC생장적영향.재24～30℃지간SFEC생장량호,단당온도저우18℃시세포생장속도명현감만.재함15% FBS적배양기중,SFEC생장속도명현비재함7.5% FBS적배양기중쾌,재배양기중첨가bFGF가이사세포생장속도현저제고.SFEC적이배체핵형위2n=6st+42t.장GFP보고기인통과지질체개도적방법전입SFEC중병성공지획득료표체,전화솔위20%.
