中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
10期
79-83
,共5页
唐咸来%熊建文%梁璇%申佩弘%武波
唐鹹來%熊建文%樑璇%申珮弘%武波
당함래%웅건문%량선%신패홍%무파
假单胞菌%苯甲酸钠%苯甲酸双加氧酶基因簇%邻苯二酚
假單胞菌%苯甲痠鈉%苯甲痠雙加氧酶基因簇%鄰苯二酚
가단포균%분갑산납%분갑산쌍가양매기인족%린분이분
利用PCR技术以Pseudomonas sp. B3-1基因组DNA为模板,扩增出2.9kb编码苯甲酸双加氧酶基因簇benABC.将该基因簇连接于pLAFRJ载体,电转化至E.coli DH5α,再通过三亲本结合法导入野生菌株Pseudomonas sp. B3-1中,得到了一株邻苯二酚产量提高的基因工程菌,命名为Pseudomonas sp.B4,在相同发酵条件下,工程菌Pseudomonas sp.B4的邻苯二酚产量达到0.5mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp. B3-1提高了17.5%.对工程菌Pseudomonas sp.B4进行发酵条件优化表明,当苯甲酸钠浓度为6.0 g/L,聚蛋白胨浓度为2.5 g/L,温度为32℃以及pH值为6.0时,工程菌在200r/min旋转摇床发酵36小时后,邻苯二酚产量达到0.7 mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp. B3-1提高了75%.
利用PCR技術以Pseudomonas sp. B3-1基因組DNA為模闆,擴增齣2.9kb編碼苯甲痠雙加氧酶基因簇benABC.將該基因簇連接于pLAFRJ載體,電轉化至E.coli DH5α,再通過三親本結閤法導入野生菌株Pseudomonas sp. B3-1中,得到瞭一株鄰苯二酚產量提高的基因工程菌,命名為Pseudomonas sp.B4,在相同髮酵條件下,工程菌Pseudomonas sp.B4的鄰苯二酚產量達到0.5mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp. B3-1提高瞭17.5%.對工程菌Pseudomonas sp.B4進行髮酵條件優化錶明,噹苯甲痠鈉濃度為6.0 g/L,聚蛋白胨濃度為2.5 g/L,溫度為32℃以及pH值為6.0時,工程菌在200r/min鏇轉搖床髮酵36小時後,鄰苯二酚產量達到0.7 mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp. B3-1提高瞭75%.
이용PCR기술이Pseudomonas sp. B3-1기인조DNA위모판,확증출2.9kb편마분갑산쌍가양매기인족benABC.장해기인족련접우pLAFRJ재체,전전화지E.coli DH5α,재통과삼친본결합법도입야생균주Pseudomonas sp. B3-1중,득도료일주린분이분산량제고적기인공정균,명명위Pseudomonas sp.B4,재상동발효조건하,공정균Pseudomonas sp.B4적린분이분산량체도0.5mg/ml,비야생균주Pseudomonas sp. B3-1제고료17.5%.대공정균Pseudomonas sp.B4진행발효조건우화표명,당분갑산납농도위6.0 g/L,취단백동농도위2.5 g/L,온도위32℃이급pH치위6.0시,공정균재200r/min선전요상발효36소시후,린분이분산량체도0.7 mg/ml,비야생균주Pseudomonas sp. B3-1제고료75%.
