CAJ | 학술논문

目的:通过观察高糖培养条件下大鼠肾小球系膜细胞P-STAT3的表达变化,探讨糖尿病状态下JAK2/STAT3途径活性的变化及该通路与活性氧簇(ROS)之间的相互作用.方法:用传代培养的大鼠肾小球系膜细胞同步化后分组:(1)正常糖浓度组(舍5.5 mmol/L),高糖浓度组(25 mmol/L),甘露醇组(5.5 mmol/L糖+19.5 mmol甘露醇),正常糖+AG-490(浓度10 μmol/L)组,高糖+AG-490(浓度10 μmol/L)组.继续观察培养后用Westem Blot及细胞免疫化学方法检测系膜细胞SFAT3、P-STAT3表达的变化.(2)正常糖浓度组(N),高糖浓度组(H),甘露醇组(M),正常糖+Apocynin组(N+A,Apocynin浓度为100 μmol/L),高糖+Apocynin组(H+A,Apocynin浓度为100 μmol/L),收集上清液,用比色法检测系膜细胞ROS水平.(3)NADPH氧化酶抑制剂Apocynin预处理,分组同(2),Apocynin提前1 h加入,与正常糖或高糖同时培养后,用Western Blot方法检测系膜细胞P-STAT3表达.结果:(1)高糖培养大鼠肾小球系膜细胞P-STAT3的表达较正常糖浓度组明显升高,甘露醇组与正常糖浓度组相比差异无统计学意义;各组之间STAT3表达差异无统计学意义.(2)高糖条件下,ROS产生明显升高,NADPH氧化酶抑制剂Apocynin可明显降低ROS的产生.(3)高糖条件下,Apocynin经预处理,在正常糖浓度和高糖浓度同时培养48 h后,正常糖浓度组和正常糖+Apocynin组对比P-STAT3的表达差异无明显区别;高糖+Apocynin组较正常糖浓度组有明显区别,但与高糖组相比明显降低.结论:高糖通过磷酸化方式激活大鼠肾小球系膜细胞JAK2/STAT3信号转导通路;高糖作用下,肾小球系膜细胞ROS产生增加,并具有时间依赖性;高糖状态下ROS可激活肾小球系膜细胞的JAK2/STAT3信号传导通路,证明ROS可能参与糖尿病肾病的发生和发展过程.
목적:통과관찰고당배양조건하대서신소구계막세포P-STAT3적표체변화,탐토당뇨병상태하JAK2/STAT3도경활성적변화급해통로여활성양족(ROS)지간적상호작용.방법:용전대배양적대서신소구계막세포동보화후분조:(1)정상당농도조(사5.5 mmol/L),고당농도조(25 mmol/L),감로순조(5.5 mmol/L당+19.5 mmol감로순),정상당+AG-490(농도10 μmol/L)조,고당+AG-490(농도10 μmol/L)조.계속관찰배양후용Westem Blot급세포면역화학방법검측계막세포SFAT3、P-STAT3표체적변화.(2)정상당농도조(N),고당농도조(H),감로순조(M),정상당+Apocynin조(N+A,Apocynin농도위100 μmol/L),고당+Apocynin조(H+A,Apocynin농도위100 μmol/L),수집상청액,용비색법검측계막세포ROS수평.(3)NADPH양화매억제제Apocynin예처리,분조동(2),Apocynin제전1 h가입,여정상당혹고당동시배양후,용Western Blot방법검측계막세포P-STAT3표체.결과:(1)고당배양대서신소구계막세포P-STAT3적표체교정상당농도조명현승고,감로순조여정상당농도조상비차이무통계학의의;각조지간STAT3표체차이무통계학의의.(2)고당조건하,ROS산생명현승고,NADPH양화매억제제Apocynin가명현강저ROS적산생.(3)고당조건하,Apocynin경예처리,재정상당농도화고당농도동시배양48 h후,정상당농도조화정상당+Apocynin조대비P-STAT3적표체차이무명현구별;고당+Apocynin조교정상당농도조유명현구별,단여고당조상비명현강저.결론:고당통과린산화방식격활대서신소구계막세포JAK2/STAT3신호전도통로;고당작용하,신소구계막세포ROS산생증가,병구유시간의뢰성;고당상태하ROS가격활신소구계막세포적JAK2/STAT3신호전도통로,증명ROS가능삼여당뇨병신병적발생화발전과정.