中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2012年
2期
13-16
,共4页
许邹亮%南文龙%陆明哲%周洁%谭鹏飞%陈义平%毛开荣
許鄒亮%南文龍%陸明哲%週潔%譚鵬飛%陳義平%毛開榮
허추량%남문룡%륙명철%주길%담붕비%진의평%모개영
布鲁菌%Cycling探针荧光定量PCR
佈魯菌%Cycling探針熒光定量PCR
포로균%Cycling탐침형광정량PCR
根据布鲁菌BCSP31基因序列设计布鲁菌通用检测引物和探针,建立了布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法.以构建的含BCSP31基因的质粒标准品10倍递进稀释为模板检测其敏感性,结果显示,本方法能检测约10个拷贝的阳性质粒,且标准曲线的线性关系良好.用本方法检测5株不同种的布鲁菌以及猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等4株对照菌.结果显示,5株不同种的布鲁菌均出现典型的“S”型扩增曲线,4株对照菌40个循环内均无CT值出现.用本方法和B4/BS-PCR方法对来自布鲁菌病流行地区3个不同牛场的40份血样、奶样和血清样进行平行检测.结果显示,本方法和B4/B5-PCR方法的结果符合率为80.0％.B4/B5-PCR检测为阳性的27份样品经本方法检测均为阳性；B4/B5-PCR检测为阴性的13份样本,经本方法检测,其中8份呈阳性,5份为阴性.本方法的敏感性明显高于B4/B5-PCR方法.试验表明,所建立的Cycling探针荧光定量PCR方法具有敏感、特异、稳定等特点,可用于布鲁菌感染的快速检测.
根據佈魯菌BCSP31基因序列設計佈魯菌通用檢測引物和探針,建立瞭佈魯菌Cycling探針熒光定量PCR檢測方法.以構建的含BCSP31基因的質粒標準品10倍遞進稀釋為模闆檢測其敏感性,結果顯示,本方法能檢測約10箇拷貝的暘性質粒,且標準麯線的線性關繫良好.用本方法檢測5株不同種的佈魯菌以及豬大腸桿菌K99、巴氏桿菌C48-1、豬鏈毬菌ST171、綠膿桿菌等4株對照菌.結果顯示,5株不同種的佈魯菌均齣現典型的“S”型擴增麯線,4株對照菌40箇循環內均無CT值齣現.用本方法和B4/BS-PCR方法對來自佈魯菌病流行地區3箇不同牛場的40份血樣、奶樣和血清樣進行平行檢測.結果顯示,本方法和B4/B5-PCR方法的結果符閤率為80.0％.B4/B5-PCR檢測為暘性的27份樣品經本方法檢測均為暘性；B4/B5-PCR檢測為陰性的13份樣本,經本方法檢測,其中8份呈暘性,5份為陰性.本方法的敏感性明顯高于B4/B5-PCR方法.試驗錶明,所建立的Cycling探針熒光定量PCR方法具有敏感、特異、穩定等特點,可用于佈魯菌感染的快速檢測.
근거포로균BCSP31기인서렬설계포로균통용검측인물화탐침,건립료포로균Cycling탐침형광정량PCR검측방법.이구건적함BCSP31기인적질립표준품10배체진희석위모판검측기민감성,결과현시,본방법능검측약10개고패적양성질립,차표준곡선적선성관계량호.용본방법검측5주불동충적포로균이급저대장간균K99、파씨간균C48-1、저련구균ST171、록농간균등4주대조균.결과현시,5주불동충적포로균균출현전형적“S”형확증곡선,4주대조균40개순배내균무CT치출현.용본방법화B4/BS-PCR방법대래자포로균병류행지구3개불동우장적40빈혈양、내양화혈청양진행평행검측.결과현시,본방법화B4/B5-PCR방법적결과부합솔위80.0％.B4/B5-PCR검측위양성적27빈양품경본방법검측균위양성；B4/B5-PCR검측위음성적13빈양본,경본방법검측,기중8빈정양성,5빈위음성.본방법적민감성명현고우B4/B5-PCR방법.시험표명,소건립적Cycling탐침형광정량PCR방법구유민감、특이、은정등특점,가용우포로균감염적쾌속검측.
