安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2012年
6期
617-622
,共6页
章萍萍%潘卫%曹洁%陈秋莉%王锦红%张华群%葛宜兵%祁培培%刘超%邓松华
章萍萍%潘衛%曹潔%陳鞦莉%王錦紅%張華群%葛宜兵%祁培培%劉超%鄧鬆華
장평평%반위%조길%진추리%왕금홍%장화군%갈의병%기배배%류초%산송화
CHIKV-E2%跨膜疏水性蛋白%全基因合成%缺失突变体%原核表达
CHIKV-E2%跨膜疏水性蛋白%全基因閤成%缺失突變體%原覈錶達
CHIKV-E2%과막소수성단백%전기인합성%결실돌변체%원핵표체
目的 通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1~404 aa)及其跨膜疏水区(351~378 aa)缺失突变体E2(1~350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响.方法 利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列.结合重叠延伸PCR(OE-PCR) 原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况.结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1~404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒 pET21b-E2(1~404)和pET21b-E2(1~350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1~350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1~404)有明显提高.结论 E2蛋白跨膜疏水区(351~378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高.
目的 通過對全長基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1~404 aa)及其跨膜疏水區(351~378 aa)缺失突變體E2(1~350 aa)進行原覈錶達,分析跨膜疏水區對E2蛋白在大腸桿菌中錶達的影響.方法 利用ExPasy預測軟件對E2蛋白跨膜疏水區進行預測分析,根據GenBank數據庫中CHIKV-E2氨基痠序列穫得其對應的基因序列.結閤重疊延伸PCR(OE-PCR) 原理設計用于全基因閤成的覈痠引物對CHIKV-E2全長基因(404 aa)進行體外閤成,構建全長E2蛋白及其缺失突變體原覈錶達質粒,將序列正確的兩種重組質粒分彆轉至E.coli BL21(DE3),經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE檢測重組質粒的錶達情況.結果 OE-PCR法成功閤成瞭大小為1 212 bp的編碼CHIKV-E2(1~404 aa)蛋白的全長基因,構建瞭全長E2蛋白及其缺失突變體重組錶達質粒 pET21b-E2(1~404)和pET21b-E2(1~350),經IPTG誘導錶達後,SDS-PAGE結果顯示缺失突變體pET21b-E2(1~350)融閤蛋白錶達量較pET21b-E2(1~404)有明顯提高.結論 E2蛋白跨膜疏水區(351~378 aa)對該蛋白的原覈錶達具有重要影響,缺失該疏水區的突變體在大腸桿菌中錶達量比全長E2蛋白錶達量明顯提高.
목적 통과대전장기공긍아병독포막단백E2(CHIKV-E2,1~404 aa)급기과막소수구(351~378 aa)결실돌변체E2(1~350 aa)진행원핵표체,분석과막소수구대E2단백재대장간균중표체적영향.방법 이용ExPasy예측연건대E2단백과막소수구진행예측분석,근거GenBank수거고중CHIKV-E2안기산서렬획득기대응적기인서렬.결합중첩연신PCR(OE-PCR) 원리설계용우전기인합성적핵산인물대CHIKV-E2전장기인(404 aa)진행체외합성,구건전장E2단백급기결실돌변체원핵표체질립,장서렬정학적량충중조질립분별전지E.coli BL21(DE3),경IPTG유도표체,SDS-PAGE검측중조질립적표체정황.결과 OE-PCR법성공합성료대소위1 212 bp적편마CHIKV-E2(1~404 aa)단백적전장기인,구건료전장E2단백급기결실돌변체중조표체질립 pET21b-E2(1~404)화pET21b-E2(1~350),경IPTG유도표체후,SDS-PAGE결과현시결실돌변체pET21b-E2(1~350)융합단백표체량교pET21b-E2(1~404)유명현제고.결론 E2단백과막소수구(351~378 aa)대해단백적원핵표체구유중요영향,결실해소수구적돌변체재대장간균중표체량비전장E2단백표체량명현제고.
