生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
5期
736-740
,共5页
杨志建%蔡谨%孙健%袁中一
楊誌建%蔡謹%孫健%袁中一
양지건%채근%손건%원중일
青霉素G酰化酶%粪产碱杆菌%表达%纯化
青黴素G酰化酶%糞產堿桿菌%錶達%純化
청매소G선화매%분산감간균%표체%순화
将粪产碱杆菌青霉素G酰化酶基因构建重组表达质粒pKKFPGA,pKKFPGA再转化宿主菌DH5α,所得重组菌不需诱导便能高效表达青霉素G酰化酶,表达量达2590u/L,比野生型粪产碱杆菌表达量高432倍,其菌体比活力达300(u/L)/A600.菌体破碎后的上清液经DEAE-Sepharose CL 6B离子交换层析和Butyl-Sepharose CL 4B疏水层析,即可得纯度提高20倍、比活为68.6u/mg的青霉素G酰化酶,两步纯化的总收率达91%.Western印迹分析表明5%的原前体青霉素酰化酶在胞内形成了包涵体,说明其成熟的限速步骤在胞内的运输阶段.
將糞產堿桿菌青黴素G酰化酶基因構建重組錶達質粒pKKFPGA,pKKFPGA再轉化宿主菌DH5α,所得重組菌不需誘導便能高效錶達青黴素G酰化酶,錶達量達2590u/L,比野生型糞產堿桿菌錶達量高432倍,其菌體比活力達300(u/L)/A600.菌體破碎後的上清液經DEAE-Sepharose CL 6B離子交換層析和Butyl-Sepharose CL 4B疏水層析,即可得純度提高20倍、比活為68.6u/mg的青黴素G酰化酶,兩步純化的總收率達91%.Western印跡分析錶明5%的原前體青黴素酰化酶在胞內形成瞭包涵體,說明其成熟的限速步驟在胞內的運輸階段.
장분산감간균청매소G선화매기인구건중조표체질립pKKFPGA,pKKFPGA재전화숙주균DH5α,소득중조균불수유도편능고효표체청매소G선화매,표체량체2590u/L,비야생형분산감간균표체량고432배,기균체비활력체300(u/L)/A600.균체파쇄후적상청액경DEAE-Sepharose CL 6B리자교환층석화Butyl-Sepharose CL 4B소수층석,즉가득순도제고20배、비활위68.6u/mg적청매소G선화매,량보순화적총수솔체91%.Western인적분석표명5%적원전체청매소선화매재포내형성료포함체,설명기성숙적한속보취재포내적운수계단.
