新疆医科大学学报
新疆醫科大學學報
신강의과대학학보
JOURNAL OF XINJIANG MEDICAL UNIVERSITY
2007年
2期
100-103
,共4页
热依汗·谢以提%克迪亚%阿斯哈尔%王星%何方平%温浩%何斌
熱依汗·謝以提%剋迪亞%阿斯哈爾%王星%何方平%溫浩%何斌
열의한·사이제%극적아%아사합이%왕성%하방평%온호%하빈
人类疱疹病毒8型%小衣壳蛋白ORF65基因%原核表达%生物信息学分析
人類皰疹病毒8型%小衣殼蛋白ORF65基因%原覈錶達%生物信息學分析
인류포진병독8형%소의각단백ORF65기인%원핵표체%생물신식학분석
目的:构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)小衣壳蛋白(ORF65)基因重组原核表达质粒并诱导表达,获得其重组融合蛋白.方法:软件设计引物,在引物两端添加特异性酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF65为模板,PCR扩增基因序列,克隆入原核表达载体pET-41a中,构建原核表达质粒pET41a-ORF65,转化大肠杆菌(E.coli) DH5x,经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性,转入E.coli BL21(DE3),并诱导表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法以及序列分析软件DNAMAN 5.0、Vector NTI Suite 6、Primer Primier 5对表达蛋白进行生物信息学分析.结果:测序结果表明所构建pET41a-ORF65原核表达质粒连接正确,SDS-PAGE表明ORF65基因获得成功表达,生物信息学分析显示该蛋白含有1个N 糖基化位点,2个蛋白激酶C磷酸化位点,4个胆碱激酶Ⅱ磷酸化位点,4个N 肉豆蔻酰化位点,1个酰胺化位点.BlastP数据库的相似性检索发现有与之有较高同源性的蛋白.结论:成功表达HHV-8病毒小衣壳蛋白ORF65,该蛋白与疱疹病毒衣壳蛋白的同源性较高,是疱疹病毒衣壳蛋白家族中的一员.
目的:構建人類8型皰疹病毒(HHV-8)小衣殼蛋白(ORF65)基因重組原覈錶達質粒併誘導錶達,穫得其重組融閤蛋白.方法:軟件設計引物,在引物兩耑添加特異性酶切位點,以pGEM-Teasy/ORF65為模闆,PCR擴增基因序列,剋隆入原覈錶達載體pET-41a中,構建原覈錶達質粒pET41a-ORF65,轉化大腸桿菌(E.coli) DH5x,經酶切、測序鑒定其插入序列的正確性,轉入E.coli BL21(DE3),併誘導錶達,採用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)方法以及序列分析軟件DNAMAN 5.0、Vector NTI Suite 6、Primer Primier 5對錶達蛋白進行生物信息學分析.結果:測序結果錶明所構建pET41a-ORF65原覈錶達質粒連接正確,SDS-PAGE錶明ORF65基因穫得成功錶達,生物信息學分析顯示該蛋白含有1箇N 糖基化位點,2箇蛋白激酶C燐痠化位點,4箇膽堿激酶Ⅱ燐痠化位點,4箇N 肉豆蔻酰化位點,1箇酰胺化位點.BlastP數據庫的相似性檢索髮現有與之有較高同源性的蛋白.結論:成功錶達HHV-8病毒小衣殼蛋白ORF65,該蛋白與皰疹病毒衣殼蛋白的同源性較高,是皰疹病毒衣殼蛋白傢族中的一員.
목적:구건인류8형포진병독(HHV-8)소의각단백(ORF65)기인중조원핵표체질립병유도표체,획득기중조융합단백.방법:연건설계인물,재인물량단첨가특이성매절위점,이pGEM-Teasy/ORF65위모판,PCR확증기인서렬,극륭입원핵표체재체pET-41a중,구건원핵표체질립pET41a-ORF65,전화대장간균(E.coli) DH5x,경매절、측서감정기삽입서렬적정학성,전입E.coli BL21(DE3),병유도표체,채용취병희선알응효전영(SDS-PAGE)방법이급서렬분석연건DNAMAN 5.0、Vector NTI Suite 6、Primer Primier 5대표체단백진행생물신식학분석.결과:측서결과표명소구건pET41a-ORF65원핵표체질립련접정학,SDS-PAGE표명ORF65기인획득성공표체,생물신식학분석현시해단백함유1개N 당기화위점,2개단백격매C린산화위점,4개담감격매Ⅱ린산화위점,4개N 육두구선화위점,1개선알화위점.BlastP수거고적상사성검색발현유여지유교고동원성적단백.결론:성공표체HHV-8병독소의각단백ORF65,해단백여포진병독의각단백적동원성교고,시포진병독의각단백가족중적일원.
