暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2007年
4期
379-384
,共6页
陈炫%沙建平%汤绍辉%唐晖%查庆兵%刘芳
陳炫%沙建平%湯紹輝%唐暉%查慶兵%劉芳
진현%사건평%탕소휘%당휘%사경병%류방
铜绿假单胞菌%LexA%纯化
銅綠假單胞菌%LexA%純化
동록가단포균%LexA%순화
目的:对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的阻遏蛋白LexA进行基因克隆、重组表达及蛋白纯化.方法:采用PCR法从PAO1株基因组中扩增出1 086 bp的LexA基因,将此基因片段插入到表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.包涵体洗涤后用8 mol/L尿素溶解,以镍离子亲合柱层析作为第1步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第2步精细纯化,反相高相液相色谱法(HPLC)测定蛋白的浓度.结果:LexA以包涵体形式表达,表达量为45%,经镍离子亲合柱层析纯化后LexA蛋白纯度达到85%以上,回收率大于80%,镍离子亲合柱层析和凝胶过滤层析两步纯化目的蛋白,经HPLC测定,最终目的蛋白的纯度为98.97%.结论:在pET32a(+)表达系统中实现了PA的LexA蛋白的高效表达,两步纯化法获得高纯度的目的蛋白,为进一步鉴定LexA靶位点奠定了基础.
目的:對銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的阻遏蛋白LexA進行基因剋隆、重組錶達及蛋白純化.方法:採用PCR法從PAO1株基因組中擴增齣1 086 bp的LexA基因,將此基因片段插入到錶達載體pET32a(+)上,併在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達.包涵體洗滌後用8 mol/L尿素溶解,以鎳離子親閤柱層析作為第1步純化,Superdex75凝膠過濾層析作為第2步精細純化,反相高相液相色譜法(HPLC)測定蛋白的濃度.結果:LexA以包涵體形式錶達,錶達量為45%,經鎳離子親閤柱層析純化後LexA蛋白純度達到85%以上,迴收率大于80%,鎳離子親閤柱層析和凝膠過濾層析兩步純化目的蛋白,經HPLC測定,最終目的蛋白的純度為98.97%.結論:在pET32a(+)錶達繫統中實現瞭PA的LexA蛋白的高效錶達,兩步純化法穫得高純度的目的蛋白,為進一步鑒定LexA靶位點奠定瞭基礎.
목적:대동록가단포균(Pseudomonas aeruginosa,PA)적조알단백LexA진행기인극륭、중조표체급단백순화.방법:채용PCR법종PAO1주기인조중확증출1 086 bp적LexA기인,장차기인편단삽입도표체재체pET32a(+)상,병재대장간균BL21(DE3)중표체.포함체세조후용8 mol/L뇨소용해,이얼리자친합주층석작위제1보순화,Superdex75응효과려층석작위제2보정세순화,반상고상액상색보법(HPLC)측정단백적농도.결과:LexA이포함체형식표체,표체량위45%,경얼리자친합주층석순화후LexA단백순도체도85%이상,회수솔대우80%,얼리자친합주층석화응효과려층석량보순화목적단백,경HPLC측정,최종목적단백적순도위98.97%.결론:재pET32a(+)표체계통중실현료PA적LexA단백적고효표체,량보순화법획득고순도적목적단백,위진일보감정LexA파위점전정료기출.
