中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2007年
10期
1287-1289
,共3页
张艳%时成波%郭丽%范洪学
張豔%時成波%郭麗%範洪學
장염%시성파%곽려%범홍학
真核表达载体%CHO细胞%人延伸因子启动子%乙肝表面抗原%二氢叶酸还原酶基因
真覈錶達載體%CHO細胞%人延伸因子啟動子%乙肝錶麵抗原%二氫葉痠還原酶基因
진핵표체재체%CHO세포%인연신인자계동자%을간표면항원%이경협산환원매기인
目的 构建HBsAg真核表达载体,转染CHO细胞并检测其表达.方法 通过PCR法扩增出乙肝表面抗原的S基因和dhfr基因,分别克隆到T载体上,然后分别将S基因和dhfr基因克隆到pCI载体上,将pCI载体的CMV启动子替换为hEF-1α启动子.对新构建的pEF1α-S-dhfr真核表达载体进行酶切和测序鉴定.用脂质体法转染CHO(dhfr-)细胞,并用ELISA法检测HBsAg表达.结果 hEF-1α启动子、S基因和dhfr基因经测序与Genbank报道一致.真核表达载体pEF1α-S-dhfr经酶切鉴定与预期一致.转染重组质粒后的CHO细胞成功表达了HBsAg.结论 已成功构建了真核表达载体pEF1α-S-dhfr,为研究高效表达HBsAg奠定了良好的实验基础.
目的 構建HBsAg真覈錶達載體,轉染CHO細胞併檢測其錶達.方法 通過PCR法擴增齣乙肝錶麵抗原的S基因和dhfr基因,分彆剋隆到T載體上,然後分彆將S基因和dhfr基因剋隆到pCI載體上,將pCI載體的CMV啟動子替換為hEF-1α啟動子.對新構建的pEF1α-S-dhfr真覈錶達載體進行酶切和測序鑒定.用脂質體法轉染CHO(dhfr-)細胞,併用ELISA法檢測HBsAg錶達.結果 hEF-1α啟動子、S基因和dhfr基因經測序與Genbank報道一緻.真覈錶達載體pEF1α-S-dhfr經酶切鑒定與預期一緻.轉染重組質粒後的CHO細胞成功錶達瞭HBsAg.結論 已成功構建瞭真覈錶達載體pEF1α-S-dhfr,為研究高效錶達HBsAg奠定瞭良好的實驗基礎.
목적 구건HBsAg진핵표체재체,전염CHO세포병검측기표체.방법 통과PCR법확증출을간표면항원적S기인화dhfr기인,분별극륭도T재체상,연후분별장S기인화dhfr기인극륭도pCI재체상,장pCI재체적CMV계동자체환위hEF-1α계동자.대신구건적pEF1α-S-dhfr진핵표체재체진행매절화측서감정.용지질체법전염CHO(dhfr-)세포,병용ELISA법검측HBsAg표체.결과 hEF-1α계동자、S기인화dhfr기인경측서여Genbank보도일치.진핵표체재체pEF1α-S-dhfr경매절감정여예기일치.전염중조질립후적CHO세포성공표체료HBsAg.결론 이성공구건료진핵표체재체pEF1α-S-dhfr,위연구고효표체HBsAg전정료량호적실험기출.
