中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2008年
1期
10-15
,共6页
陈永乐%周光前%邓宇斌%智伟%谢彗琪%邓力%杨志明%王亚柱
陳永樂%週光前%鄧宇斌%智偉%謝彗琪%鄧力%楊誌明%王亞柱
진영악%주광전%산우빈%지위%사혜기%산력%양지명%왕아주
成肌细胞%肌细胞%肌管%定向分化%基因表达
成肌細胞%肌細胞%肌管%定嚮分化%基因錶達
성기세포%기세포%기관%정향분화%기인표체
[目的] 观察低浓度马血清体外诱导成肌细胞C2C12向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用,探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制.[方法] 将C2C12成肌细胞用含不同浓度马血清的高糖DMEM培养基培养,收集细胞,在相差显微镜下观察形态变化,并通过免疫细胞化学(Imminocytochemistry,ICC)及RT-PCR方法分别检测肌性相关基因表达的改变.[结果] ①20 mL/L和50 mL/L的马血清均能促使C2C12细胞形成肌小管,20 mL/L浓度马血清诱导效率最好(第7天时肌小管形成率分别为31.4%±2.1%和19.0%±1.6%,P<0.001).②20 mL/L马血清诱导3～4 d开始有肌管形成,之后肌管越来越多,到8～9 d达高峰(第9天40.2%±1.3%),往后细胞逐渐衰老死亡.③20 mL/L马血清诱导C2C12细胞向成熟肌细胞分化过程中,肌相关蛋白分子表达发生变化:结蛋白(desmin)、成肌分化抗原(MyoD)、生肌素(myogenin)和肌球蛋白(myosin)等表达逐渐增强(未刺激时分别约为49.6%±1.1%、23.4%±1.1%、4.8%±1.6%和2.6%±1.5%;第6天时分别提高为80.4%±1.8%、85.4%±1.1%、22.2%±1.1%和26.0%±1.6%;P<0.001);desmin、MyoD和myogenin相应mRNA分子也可以通过RT-PCR检测到.[结论] ①低浓度的马血清能够有效刺激C2C12成肌细胞向成熟细胞分化,以20 mL/L浓度效果最好;②C2C12细胞是研究肌细胞发育分化的理想模板;③肌分化发育过程比较复杂,许多因素都可能起影响,研究设计要尽量标准化.
[目的] 觀察低濃度馬血清體外誘導成肌細胞C2C12嚮成熟肌細胞分化、形成肌管的作用,探索定嚮誘導肌分化的途徑及其分子機製.[方法] 將C2C12成肌細胞用含不同濃度馬血清的高糖DMEM培養基培養,收集細胞,在相差顯微鏡下觀察形態變化,併通過免疫細胞化學(Imminocytochemistry,ICC)及RT-PCR方法分彆檢測肌性相關基因錶達的改變.[結果] ①20 mL/L和50 mL/L的馬血清均能促使C2C12細胞形成肌小管,20 mL/L濃度馬血清誘導效率最好(第7天時肌小管形成率分彆為31.4%±2.1%和19.0%±1.6%,P<0.001).②20 mL/L馬血清誘導3～4 d開始有肌管形成,之後肌管越來越多,到8～9 d達高峰(第9天40.2%±1.3%),往後細胞逐漸衰老死亡.③20 mL/L馬血清誘導C2C12細胞嚮成熟肌細胞分化過程中,肌相關蛋白分子錶達髮生變化:結蛋白(desmin)、成肌分化抗原(MyoD)、生肌素(myogenin)和肌毬蛋白(myosin)等錶達逐漸增彊(未刺激時分彆約為49.6%±1.1%、23.4%±1.1%、4.8%±1.6%和2.6%±1.5%;第6天時分彆提高為80.4%±1.8%、85.4%±1.1%、22.2%±1.1%和26.0%±1.6%;P<0.001);desmin、MyoD和myogenin相應mRNA分子也可以通過RT-PCR檢測到.[結論] ①低濃度的馬血清能夠有效刺激C2C12成肌細胞嚮成熟細胞分化,以20 mL/L濃度效果最好;②C2C12細胞是研究肌細胞髮育分化的理想模闆;③肌分化髮育過程比較複雜,許多因素都可能起影響,研究設計要儘量標準化.
[목적] 관찰저농도마혈청체외유도성기세포C2C12향성숙기세포분화、형성기관적작용,탐색정향유도기분화적도경급기분자궤제.[방법] 장C2C12성기세포용함불동농도마혈청적고당DMEM배양기배양,수집세포,재상차현미경하관찰형태변화,병통과면역세포화학(Imminocytochemistry,ICC)급RT-PCR방법분별검측기성상관기인표체적개변.[결과] ①20 mL/L화50 mL/L적마혈청균능촉사C2C12세포형성기소관,20 mL/L농도마혈청유도효솔최호(제7천시기소관형성솔분별위31.4%±2.1%화19.0%±1.6%,P<0.001).②20 mL/L마혈청유도3～4 d개시유기관형성,지후기관월래월다,도8～9 d체고봉(제9천40.2%±1.3%),왕후세포축점쇠로사망.③20 mL/L마혈청유도C2C12세포향성숙기세포분화과정중,기상관단백분자표체발생변화:결단백(desmin)、성기분화항원(MyoD)、생기소(myogenin)화기구단백(myosin)등표체축점증강(미자격시분별약위49.6%±1.1%、23.4%±1.1%、4.8%±1.6%화2.6%±1.5%;제6천시분별제고위80.4%±1.8%、85.4%±1.1%、22.2%±1.1%화26.0%±1.6%;P<0.001);desmin、MyoD화myogenin상응mRNA분자야가이통과RT-PCR검측도.[결론] ①저농도적마혈청능구유효자격C2C12성기세포향성숙세포분화,이20 mL/L농도효과최호;②C2C12세포시연구기세포발육분화적이상모판;③기분화발육과정비교복잡,허다인소도가능기영향,연구설계요진량표준화.
