CAJ | 학술논문

背景与目的 Raf是Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路中的关键分子,在多种人类肿瘤中存在高度活化,然而其生物学功能和详细调节机理目前尚未完全明了.本研究旨在构建人Raf基因全长(Raf-1),氨基端(N-Raf)及羧基端(C-Raf)真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达情况.方法通过PCR方法扩增Raf-1,N-Raf和C-Raf目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tas2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tas2b-C-Raf真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定.鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,Western blot检测目的蛋白的表达.结果酶切和测序结果均证实pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tas2b-C-Raf真核表达载体的序列和编码框均正确无误,转染后的293T细胞经Western Blot检测可正确表达目的蛋白.结论本研究成功构建TpCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体并可在293T细胞中表达,为今后进一步研究Raf基因的生物学机理奠定了基础.
배경여목적 Raf시Ras-Raf-MEK-ERK신호전도통로중적관건분자,재다충인류종류중존재고도활화,연이기생물학공능화상세조절궤리목전상미완전명료.본연구지재구건인Raf기인전장(Raf-1),안기단(N-Raf)급최기단(C-Raf)진핵표체재체,병관찰기재293T세포중적표체정황.방법 통과PCR방법확증Raf-1,N-Raf화C-Raf목적편단,이용기인중조기술구건pCMV-Tas2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf화pCMV-Tas2b-C-Raf진핵표체재체,병진행매절화측서감정.감정정학적극륭순시전염293T세포,Western blot검측목적단백적표체.결과 매절화측서결과균증실pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf화pCMV-Tas2b-C-Raf진핵표체재체적서렬화편마광균정학무오,전염후적293T세포경Western Blot검측가정학표체목적단백.결론 본연구성공구건TpCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf화pCMV-Tag2b-C-Raf진핵표체재체병가재293T세포중표체,위금후진일보연구Raf기인적생물학궤리전정료기출.