现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2011年
4期
656-659
,共4页
刘文康%姜向阳%任健康%楚雍烈
劉文康%薑嚮暘%任健康%楚雍烈
류문강%강향양%임건강%초옹렬
HPV16%宫颈癌%E6基因%RNA干扰
HPV16%宮頸癌%E6基因%RNA榦擾
HPV16%궁경암%E6기인%RNA간우
目的:研究RNAi 技术抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6 癌基因的表达以及对细胞生物学特性的影响.方法:构建真核细胞表达特异性shRNA的pGENESIL-1/E6 (PS6)重组质粒,脂质体转染细胞后用半定量RT-PCR技术检测CaSKi细胞中E6mRNA 水平的变化,然后用western blotting检测RNA干扰前后p53和p21蛋白的表达来验证RNAi效应.用透射电子显微镜观察CaSKi/PS6细胞形态变化;应用流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,最后利用细胞计数和裸鼠成瘤实验测定CaSKi/PS6 细胞增殖能力.结果:成功构建了真核细胞表达特异性siRNA的PS6 重组质粒;在RNA干扰24、48和72小时后CaSKi/PS6细胞中E6mRNA分别下降了21.50%、52.60%和65.60%;CaSKi/PS6 细胞出现凋亡的特征性改变;RNA干扰24h、48h和72h后CaSKi/PS6细胞的凋亡率分别为27.94%、31.95%和56.63%,细胞生长周期停滞于S期.结论:应用RNA干扰技术能有效地、特异地抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6基因的表达,为RNA干扰应用于研究宫颈癌发病分子机制、临床治疗和干预性预防提供了新的方法.
目的:研究RNAi 技術抑製宮頸癌細胞CaSKi中HPV16 E6 癌基因的錶達以及對細胞生物學特性的影響.方法:構建真覈細胞錶達特異性shRNA的pGENESIL-1/E6 (PS6)重組質粒,脂質體轉染細胞後用半定量RT-PCR技術檢測CaSKi細胞中E6mRNA 水平的變化,然後用western blotting檢測RNA榦擾前後p53和p21蛋白的錶達來驗證RNAi效應.用透射電子顯微鏡觀察CaSKi/PS6細胞形態變化;應用流式細胞儀檢測細胞的凋亡和細胞週期的變化,最後利用細胞計數和裸鼠成瘤實驗測定CaSKi/PS6 細胞增殖能力.結果:成功構建瞭真覈細胞錶達特異性siRNA的PS6 重組質粒;在RNA榦擾24、48和72小時後CaSKi/PS6細胞中E6mRNA分彆下降瞭21.50%、52.60%和65.60%;CaSKi/PS6 細胞齣現凋亡的特徵性改變;RNA榦擾24h、48h和72h後CaSKi/PS6細胞的凋亡率分彆為27.94%、31.95%和56.63%,細胞生長週期停滯于S期.結論:應用RNA榦擾技術能有效地、特異地抑製宮頸癌細胞中HPV16 E6基因的錶達,為RNA榦擾應用于研究宮頸癌髮病分子機製、臨床治療和榦預性預防提供瞭新的方法.
목적:연구RNAi 기술억제궁경암세포CaSKi중HPV16 E6 암기인적표체이급대세포생물학특성적영향.방법:구건진핵세포표체특이성shRNA적pGENESIL-1/E6 (PS6)중조질립,지질체전염세포후용반정량RT-PCR기술검측CaSKi세포중E6mRNA 수평적변화,연후용western blotting검측RNA간우전후p53화p21단백적표체래험증RNAi효응.용투사전자현미경관찰CaSKi/PS6세포형태변화;응용류식세포의검측세포적조망화세포주기적변화,최후이용세포계수화라서성류실험측정CaSKi/PS6 세포증식능력.결과:성공구건료진핵세포표체특이성siRNA적PS6 중조질립;재RNA간우24、48화72소시후CaSKi/PS6세포중E6mRNA분별하강료21.50%、52.60%화65.60%;CaSKi/PS6 세포출현조망적특정성개변;RNA간우24h、48h화72h후CaSKi/PS6세포적조망솔분별위27.94%、31.95%화56.63%,세포생장주기정체우S기.결론:응용RNA간우기술능유효지、특이지억제궁경암세포중HPV16 E6기인적표체,위RNA간우응용우연구궁경암발병분자궤제、림상치료화간예성예방제공료신적방법.
