生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
8期
99-102,114
,共5页
李晓薇%苏连泰%赵旭%翟莹%张海军%张庆林%李景文%王庆钰
李曉薇%囌連泰%趙旭%翟瑩%張海軍%張慶林%李景文%王慶鈺
리효미%소련태%조욱%적형%장해군%장경림%리경문%왕경옥
大豆%MYB转录因子%载体构建%pET-28a(+)%Rosetta(DE3)%原核表达
大豆%MYB轉錄因子%載體構建%pET-28a(+)%Rosetta(DE3)%原覈錶達
대두%MYB전록인자%재체구건%pET-28a(+)%Rosetta(DE3)%원핵표체
大豆(Glycine max)GmMYB12a与GmMYB12B2基因属于典型的植物R2R3-MYB转录因子.为进一步研究两个MYB12转录因子与相应顺式作用元件的相互作用,构建了两基因的原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中实现高效表达.利用PCR技术,将两端带有特异酶切位点的GmMYB12a与GrnMYB12B2全长基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+),酶切、测序鉴定确认获得两基因的重组原核表达载体pET-28a-GmMYB12a与pET-28a-GmMYB1 2B2.然后把重组载体转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况.结果表明,成功构建了两基因的原核表达载体,在IPTG浓度为1.2 mmol/L,诱导6h后,目的蛋白能在Rosetta(DE3)中高效表达.
大豆(Glycine max)GmMYB12a與GmMYB12B2基因屬于典型的植物R2R3-MYB轉錄因子.為進一步研究兩箇MYB12轉錄因子與相應順式作用元件的相互作用,構建瞭兩基因的原覈錶達載體,併在大腸桿菌Rosetta(DE3)中實現高效錶達.利用PCR技術,將兩耑帶有特異酶切位點的GmMYB12a與GrnMYB12B2全長基因亞剋隆于原覈錶達載體pET-28a(+),酶切、測序鑒定確認穫得兩基因的重組原覈錶達載體pET-28a-GmMYB12a與pET-28a-GmMYB1 2B2.然後把重組載體轉化到大腸桿菌Rosetta(DE3)中,經IPTG誘導蛋白錶達,提取細胞蛋白併採用SDS-PAGE檢測目的蛋白的錶達情況.結果錶明,成功構建瞭兩基因的原覈錶達載體,在IPTG濃度為1.2 mmol/L,誘導6h後,目的蛋白能在Rosetta(DE3)中高效錶達.
대두(Glycine max)GmMYB12a여GmMYB12B2기인속우전형적식물R2R3-MYB전록인자.위진일보연구량개MYB12전록인자여상응순식작용원건적상호작용,구건료량기인적원핵표체재체,병재대장간균Rosetta(DE3)중실현고효표체.이용PCR기술,장량단대유특이매절위점적GmMYB12a여GrnMYB12B2전장기인아극륭우원핵표체재체pET-28a(+),매절、측서감정학인획득량기인적중조원핵표체재체pET-28a-GmMYB12a여pET-28a-GmMYB1 2B2.연후파중조재체전화도대장간균Rosetta(DE3)중,경IPTG유도단백표체,제취세포단백병채용SDS-PAGE검측목적단백적표체정황.결과표명,성공구건료량기인적원핵표체재체,재IPTG농도위1.2 mmol/L,유도6h후,목적단백능재Rosetta(DE3)중고효표체.
