中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
9期
774-777,786
,共5页
王雪莲%栾和芝%刘彤%赵雨杰%安春丽
王雪蓮%欒和芝%劉彤%趙雨傑%安春麗
왕설련%란화지%류동%조우걸%안춘려
肺孢子菌%p55蛋白%嵌合基因%重组融合蛋白
肺孢子菌%p55蛋白%嵌閤基因%重組融閤蛋白
폐포자균%p55단백%감합기인%중조융합단백
目的 构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物.方法 自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,将人工合成的嵌合基因(CAG)片段连接到质粒pGEX-6p-1(含GST标签)上,构建原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,酶切、测序鉴定.pGEX-6p-1/CAG转化大肠杆菌,异丙基-βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白CAG-GST.表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鉴定.结果 双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6p-1/CAG构建成功.SDSPAGE显示重组融合蛋白相对分子量约为69 000.Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白为CAG-GST.结论 成功构建表达p55蛋白嵌合基因的原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,建立表达重组蛋白的原核表达系统.
目的 構建肺孢子蟲(菌)p55蛋白嵌閤基因的原覈錶達載體,分析、鑒定及純化錶達產物.方法 自NCBI網站的蛋白數據庫中穫取p55抗原及4箇變異體信息,運用生物信息學方法預測可能的抗原錶位,設計包含多箇可能抗原錶位的多肽,根據遺傳中心法則及大腸桿菌密碼子偏好性進行密碼子優化,將氨基痠序列轉化為覈苷痠序列,將人工閤成的嵌閤基因(CAG)片段連接到質粒pGEX-6p-1(含GST標籤)上,構建原覈錶達載體pGEX-6p-1/CAG,酶切、測序鑒定.pGEX-6p-1/CAG轉化大腸桿菌,異丙基-βD硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達重組融閤蛋白CAG-GST.錶達產物用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鑒定.結果 雙酶切及測序結果顯示重組質粒pGEX-6p-1/CAG構建成功.SDSPAGE顯示重組融閤蛋白相對分子量約為69 000.Western-blotting結果顯示,錶達的融閤蛋白為CAG-GST.結論 成功構建錶達p55蛋白嵌閤基因的原覈錶達載體pGEX-6p-1/CAG,建立錶達重組蛋白的原覈錶達繫統.
목적 구건폐포자충(균)p55단백감합기인적원핵표체재체,분석、감정급순화표체산물.방법 자NCBI망참적단백수거고중획취p55항원급4개변이체신식,운용생물신식학방법예측가능적항원표위,설계포함다개가능항원표위적다태,근거유전중심법칙급대장간균밀마자편호성진행밀마자우화,장안기산서렬전화위핵감산서렬,장인공합성적감합기인(CAG)편단련접도질립pGEX-6p-1(함GST표첨)상,구건원핵표체재체pGEX-6p-1/CAG,매절、측서감정.pGEX-6p-1/CAG전화대장간균,이병기-βD류대반유당감(IPTG)유도표체중조융합단백CAG-GST.표체산물용SDS-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)급Western-blotting분석감정.결과 쌍매절급측서결과현시중조질립pGEX-6p-1/CAG구건성공.SDSPAGE현시중조융합단백상대분자량약위69 000.Western-blotting결과현시,표체적융합단백위CAG-GST.결론 성공구건표체p55단백감합기인적원핵표체재체pGEX-6p-1/CAG,건립표체중조단백적원핵표체계통.
