安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2012年
2期
109-112
,共4页
周超群%储德勇%姚涌%汪学龙
週超群%儲德勇%姚湧%汪學龍
주초군%저덕용%요용%왕학룡
基因表达%小鼠sIL-13Rα2基因%原核表达载体
基因錶達%小鼠sIL-13Rα2基因%原覈錶達載體
기인표체%소서sIL-13Rα2기인%원핵표체재체
目的 克隆并在原核表达载体pET-28a中表达小鼠IL-13受体α2(sIL-13Rα2)胞外区基因.方法 利用小鼠3T3细胞总RNA,逆转录为cDNA,设计引物,常规PCR法扩增出小鼠sIL-13Rα2 基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,经双酶切及测序鉴定后,再亚克隆入pET-28a,构建重组质粒pET-28a/sIL-13Rα2,并转化到大肠杆菌BL21感受态细胞.IPTG 诱导表达后表达产物经Western blot鉴定.结果 PCR扩增产物与预期大小相符合,重组质粒经双酶切鉴定及基因序列测定表明构建正确; sIL-13Rα2 蛋白表达以包涵体形式存在,可与山羊抗小鼠sIL-13Rα2 单克隆抗体发生特异性反应,相对分子质量约为36 ku.结论 成功原核表达sIL-13Rα2基因,为进一步探讨sIL-13Rα2在血吸虫病肝纤维化过程中的调节作用奠定了基础.
目的 剋隆併在原覈錶達載體pET-28a中錶達小鼠IL-13受體α2(sIL-13Rα2)胞外區基因.方法 利用小鼠3T3細胞總RNA,逆轉錄為cDNA,設計引物,常規PCR法擴增齣小鼠sIL-13Rα2 基因,將PCR產物剋隆入pMD18-T載體,經雙酶切及測序鑒定後,再亞剋隆入pET-28a,構建重組質粒pET-28a/sIL-13Rα2,併轉化到大腸桿菌BL21感受態細胞.IPTG 誘導錶達後錶達產物經Western blot鑒定.結果 PCR擴增產物與預期大小相符閤,重組質粒經雙酶切鑒定及基因序列測定錶明構建正確; sIL-13Rα2 蛋白錶達以包涵體形式存在,可與山羊抗小鼠sIL-13Rα2 單剋隆抗體髮生特異性反應,相對分子質量約為36 ku.結論 成功原覈錶達sIL-13Rα2基因,為進一步探討sIL-13Rα2在血吸蟲病肝纖維化過程中的調節作用奠定瞭基礎.
목적 극륭병재원핵표체재체pET-28a중표체소서IL-13수체α2(sIL-13Rα2)포외구기인.방법 이용소서3T3세포총RNA,역전록위cDNA,설계인물,상규PCR법확증출소서sIL-13Rα2 기인,장PCR산물극륭입pMD18-T재체,경쌍매절급측서감정후,재아극륭입pET-28a,구건중조질립pET-28a/sIL-13Rα2,병전화도대장간균BL21감수태세포.IPTG 유도표체후표체산물경Western blot감정.결과 PCR확증산물여예기대소상부합,중조질립경쌍매절감정급기인서렬측정표명구건정학; sIL-13Rα2 단백표체이포함체형식존재,가여산양항소서sIL-13Rα2 단극륭항체발생특이성반응,상대분자질량약위36 ku.결론 성공원핵표체sIL-13Rα2기인,위진일보탐토sIL-13Rα2재혈흡충병간섬유화과정중적조절작용전정료기출.
