CAJ | 학술논문

目的:制备人类致病病毒属水平高通量筛查用基因芯片,并通过检测黄病毒属病毒初步验证其筛查效果.方法:利用Clustal W和BLAST软件设计针对人类致病病毒的属特异性寡核苷酸探针,对探针浓度、杂交温度、杂交时间、不同杂交液及杂交后芯片的洗涤方法进行优化.分别用特异或随机PCR方法从病毒感染的细胞培养上清中扩增病毒核酸,在扩增过程中掺入aa-dUTP并进一步偶联Cy5或Cy3荧光素进行标记,随后与基因芯片进行杂交,并通过荧光扫描仪对杂交结果进行分析,然后分析检测的特异性和敏感性验证基因芯片的筛查效果.结果:共设计了针对人类医学病毒的1 090条寡核苷酸探针及其他阳性、阴性对照探针,其中黄病毒属共46条探针,Tm值为77.67～83.53℃,通过随机或特异PCR扩增8株黄病毒属病毒核酸,在42℃、过夜杂交的条件下,通过基因芯片方法均获得了黄病毒属特异性杂交信号,与其他属病毒之间没有非特异性交叉反应.结论:所制备的基因芯片可用于黄病毒属病毒的快速筛查,本研究为进一步建立大规模病毒性病原体的高通量筛查与鉴定技术平台提供了实验依据.
목적:제비인류치병병독속수평고통량사사용기인심편,병통과검측황병독속병독초보험증기사사효과.방법:이용Clustal W화BLAST연건설계침대인류치병병독적속특이성과핵감산탐침,대탐침농도、잡교온도、잡교시간、불동잡교액급잡교후심편적세조방법진행우화.분별용특이혹수궤PCR방법종병독감염적세포배양상청중확증병독핵산,재확증과정중참입aa-dUTP병진일보우련Cy5혹Cy3형광소진행표기,수후여기인심편진행잡교,병통과형광소묘의대잡교결과진행분석,연후분석검측적특이성화민감성험증기인심편적사사효과.결과:공설계료침대인류의학병독적1 090조과핵감산탐침급기타양성、음성대조탐침,기중황병독속공46조탐침,Tm치위77.67～83.53℃,통과수궤혹특이PCR확증8주황병독속병독핵산,재42℃、과야잡교적조건하,통과기인심편방법균획득료황병독속특이성잡교신호,여기타속병독지간몰유비특이성교차반응.결론:소제비적기인심편가용우황병독속병독적쾌속사사,본연구위진일보건립대규모병독성병원체적고통량사사여감정기술평태제공료실험의거.