中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
100-104
,共5页
李昌%金宁一%刘玉生%于芳%金洪涛%李臻%佟敬山%胡宁宁
李昌%金寧一%劉玉生%于芳%金洪濤%李臻%佟敬山%鬍寧寧
리창%금저일%류옥생%우방%금홍도%리진%동경산%호저저
核糖体失活蛋白%原核表达%Cyanovirin-N%LuffinP1
覈糖體失活蛋白%原覈錶達%Cyanovirin-N%LuffinP1
핵당체실활단백%원핵표체%Cyanovirin-N%LuffinP1
目的:构建重组抗病毒融合蛋白CVN-LP1原核表达载体,并进行表达和鉴定.方法:将已经构建好的pET-CVN和pET-LP1重组质粒,EcoRI和HindⅢ同时进行双酶切,保留LP1片段前端的linker序列.将所得的CVN片段连入pET-LP1载体上,构建pET-CVN-LP1融合表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.SDS-PAGE、Western-blot鉴定表达产物.结果:重组载体pET-28a(+)-CVN-LP1经PCR及XhoⅠ/EcoRⅠ和EcoRL/HindⅢ双酶切鉴定,证实构建成功.将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物相对分子量约为20kDa,与理论大小一致.凝胶成像分析表明最高表达量可占菌体总蛋白的49.58%.SDS-PAGE、Western-blot分析表明目的蛋白得到了很好的表达.结论:构建了pET-CVN-LP1原核表达载体,并得到了目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础.
目的:構建重組抗病毒融閤蛋白CVN-LP1原覈錶達載體,併進行錶達和鑒定.方法:將已經構建好的pET-CVN和pET-LP1重組質粒,EcoRI和HindⅢ同時進行雙酶切,保留LP1片段前耑的linker序列.將所得的CVN片段連入pET-LP1載體上,構建pET-CVN-LP1融閤錶達載體,轉化入大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達.SDS-PAGE、Western-blot鑒定錶達產物.結果:重組載體pET-28a(+)-CVN-LP1經PCR及XhoⅠ/EcoRⅠ和EcoRL/HindⅢ雙酶切鑒定,證實構建成功.將其轉化入大腸桿菌BL21(DE3)中錶達,錶達產物相對分子量約為20kDa,與理論大小一緻.凝膠成像分析錶明最高錶達量可佔菌體總蛋白的49.58%.SDS-PAGE、Western-blot分析錶明目的蛋白得到瞭很好的錶達.結論:構建瞭pET-CVN-LP1原覈錶達載體,併得到瞭目的融閤蛋白,為進一步研究其生物學功能奠定瞭堅實的基礎.
목적:구건중조항병독융합단백CVN-LP1원핵표체재체,병진행표체화감정.방법:장이경구건호적pET-CVN화pET-LP1중조질립,EcoRI화HindⅢ동시진행쌍매절,보류LP1편단전단적linker서렬.장소득적CVN편단련입pET-LP1재체상,구건pET-CVN-LP1융합표체재체,전화입대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체.SDS-PAGE、Western-blot감정표체산물.결과:중조재체pET-28a(+)-CVN-LP1경PCR급XhoⅠ/EcoRⅠ화EcoRL/HindⅢ쌍매절감정,증실구건성공.장기전화입대장간균BL21(DE3)중표체,표체산물상대분자량약위20kDa,여이론대소일치.응효성상분석표명최고표체량가점균체총단백적49.58%.SDS-PAGE、Western-blot분석표명목적단백득도료흔호적표체.결론:구건료pET-CVN-LP1원핵표체재체,병득도료목적융합단백,위진일보연구기생물학공능전정료견실적기출.
