CAJ | 학술논문

目的获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)成熟肽基因的DNA,进行原核克隆和表达.并比较它与Sj26kd的谷胱甘肽转移酶(Sj26GST)在成虫和虫卵期的转录水平.方法根据美国国立生物信息学中心(NCBI)上登录的小鼠TGF-β1基因的全长序列,设计两条位于保守区的寡核苷酸作为引物.利用RT-PCR从日本血吸虫成虫的mRNA中扩增SjTGF-β1基因的部分序列,并利用生物信息学进行分析和鉴定.克隆SjTGF-β1成熟肽基因的cDNA到原核表达载体pGEX-6p-3,将重组载体转化大肠杆菌BL21株并诱导表达.利用RT-PCR半定量分析SjTGF-β1基因与Sj26GST基因在成虫和虫卵期的转录水平.结果成功获得并构建了SjTGF-β1成熟肽基因的原核表达载体.融合表达后的重组融合蛋白经SDS-PAGE分析,显示其相对分子质量约为3 5000.与目的基因编码蛋白的预测分子量相符.SjTGF-β1在成虫与虫卵期的转录水平都低于Sj26GST基因,但虫卵期的转录水平比成虫高.结论 SjTGF-β1成熟肽基因的获得为其编码序列全长的获得奠定了基础;重组融合蛋白的成功表达为进一步的功能研究提供保障;虫卵期该基因的转录水平高提示该基因在血吸虫虫卵与宿主的相互作用中可能具有一定的作用.
목적 획득일본혈흡충(Schistosoma japonicum,Sj)전화생장인자β1(TGF-β1)성숙태기인적DNA,진행원핵극륭화표체.병비교타여Sj26kd적곡광감태전이매(Sj26GST)재성충화충란기적전록수평.방법 근거미국국립생물신식학중심(NCBI)상등록적소서TGF-β1기인적전장서렬,설계량조위우보수구적과핵감산작위인물.이용RT-PCR종일본혈흡충성충적mRNA중확증SjTGF-β1기인적부분서렬,병이용생물신식학진행분석화감정.극륭SjTGF-β1성숙태기인적cDNA도원핵표체재체pGEX-6p-3,장중조재체전화대장간균BL21주병유도표체.이용RT-PCR반정량분석SjTGF-β1기인여Sj26GST기인재성충화충란기적전록수평.결과 성공획득병구건료SjTGF-β1성숙태기인적원핵표체재체.융합표체후적중조융합단백경SDS-PAGE분석,현시기상대분자질량약위3 5000.여목적 기인편마단백적예측분자량상부.SjTGF-β1재성충여충란기적전록수평도저우Sj26GST기인,단충란기적전록수평비성충고.결론 SjTGF-β1성숙태기인적획득위기편마서렬전장적획득전정료기출;중조융합단백적성공표체위진일보적공능연구제공보장;충란기해기인적전록수평고제시해기인재혈흡충충란여숙주적상호작용중가능구유일정적작용.