CAJ | 학술논문

目的:明确脂多糖(LPS)预处理后巨噬细胞对后续热灭活革兰氏阳性金黄色葡萄球菌(HKSa)刺激的反应性变化,并探讨其机制.方法:Griess法检测细胞培养上清一氧化氮(NO)含量;实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测Toll样受体2(TLR2)mRNA和蛋白表达;双荧光报告基因检测法观察细胞内活化T细胞核因子(NF-AT)转录活性.结果:LPS预处理小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞24 h后,该细胞在后续HKSa刺激下NO生成量显著增加,提示LPS可以致敏巨噬细胞、增强其对HKSa的反应性.LPS可以剂量依赖性地增加细胞内TLR2 mRNA和蛋白表达;LPS预处理也可增强TLR2特异性配体肽聚糖刺激巨噬细胞NO生成的效应;TLR2特异性中和抗体可部分阻断LPS的致敏效应.LPS可促进NF-AT转录激活,细胞内钙离子(Ca2+)螯合剂BAPTA/AM和calcineurin抑制剂cyclosporin A(CsA)均可阻断LPS的作用;BAPTA/AM和CsA均能显著抑制LPS的致敏效应.结论:LPS可以致敏巨噬细胞,从而使其在后续HKSa作用下NO生成量增加;模式识别受体TLR2和Ca2+/calcineurin/NF-AT信号转导途径可能参与了LPS的这一致敏效应.
목적:명학지다당(LPS)예처리후거서세포대후속열멸활혁란씨양성금황색포도구균(HKSa)자격적반응성변화,병탐토기궤제.방법:Griess법검측세포배양상청일양화담(NO)함량;실시형광정량PCR화Western blotting기술검측Toll양수체2(TLR2)mRNA화단백표체;쌍형광보고기인검측법관찰세포내활화T세포핵인자(NF-AT)전록활성.결과:LPS예처리소서거서세포계RAW264.7세포24 h후,해세포재후속HKSa자격하NO생성량현저증가,제시LPS가이치민거서세포、증강기대HKSa적반응성.LPS가이제량의뢰성지증가세포내TLR2 mRNA화단백표체;LPS예처리야가증강TLR2특이성배체태취당자격거서세포NO생성적효응;TLR2특이성중화항체가부분조단LPS적치민효응.LPS가촉진NF-AT전록격활,세포내개리자(Ca2+)오합제BAPTA/AM화calcineurin억제제cyclosporin A(CsA)균가조단LPS적작용;BAPTA/AM화CsA균능현저억제LPS적치민효응.결론:LPS가이치민거서세포,종이사기재후속HKSa작용하NO생성량증가;모식식별수체TLR2화Ca2+/calcineurin/NF-AT신호전도도경가능삼여료LPS적저일치민효응.