化学与生物工程
化學與生物工程
화학여생물공정
CHEMISTRY & BIOENGINEERING
2010年
6期
50-53
,共4页
周晓明%莫隽颖%陶冶%付水林%宫衡
週曉明%莫雋穎%陶冶%付水林%宮衡
주효명%막준영%도야%부수림%궁형
黑曲霉%β-葡萄糖苷酶%序列分析%蛋白表达
黑麯黴%β-葡萄糖苷酶%序列分析%蛋白錶達
흑곡매%β-포도당감매%서렬분석%단백표체
根据GenBank报道的黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因序列设计两对特异性引物,分别以黑曲霉H7总RNA及基因组DNA为模板,扩增出β-葡萄糖苷酶基因bgl全长及活性中心所在的外显子5序列E5,分别将其连接到pMD18-T载体并转化到大肠杆菌DH5α测序.结果表明,bgl序列全长2583 bp,与β-葡萄糖苷酶基因(XM001398779.1)核苷酸序列同源性为99%,氨基酸序列同源性为99%,E5与bgl外显子5区域同源性为100%.进一步构建表达质粒pET32a(+)-bgl、pET32a(+)-E5、pET28a(+)-E5,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并进行SDS-PAGE电泳分析.
根據GenBank報道的黑麯黴β-葡萄糖苷酶基因序列設計兩對特異性引物,分彆以黑麯黴H7總RNA及基因組DNA為模闆,擴增齣β-葡萄糖苷酶基因bgl全長及活性中心所在的外顯子5序列E5,分彆將其連接到pMD18-T載體併轉化到大腸桿菌DH5α測序.結果錶明,bgl序列全長2583 bp,與β-葡萄糖苷酶基因(XM001398779.1)覈苷痠序列同源性為99%,氨基痠序列同源性為99%,E5與bgl外顯子5區域同源性為100%.進一步構建錶達質粒pET32a(+)-bgl、pET32a(+)-E5、pET28a(+)-E5,轉化大腸桿菌BL21(DE3)誘導錶達,併進行SDS-PAGE電泳分析.
근거GenBank보도적흑곡매β-포도당감매기인서렬설계량대특이성인물,분별이흑곡매H7총RNA급기인조DNA위모판,확증출β-포도당감매기인bgl전장급활성중심소재적외현자5서렬E5,분별장기련접도pMD18-T재체병전화도대장간균DH5α측서.결과표명,bgl서렬전장2583 bp,여β-포도당감매기인(XM001398779.1)핵감산서렬동원성위99%,안기산서렬동원성위99%,E5여bgl외현자5구역동원성위100%.진일보구건표체질립pET32a(+)-bgl、pET32a(+)-E5、pET28a(+)-E5,전화대장간균BL21(DE3)유도표체,병진행SDS-PAGE전영분석.
