华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2011年
2期
137-141
,共5页
郭术俊%赵保明%唐洁%胡建国%吕合作
郭術俊%趙保明%唐潔%鬍建國%呂閤作
곽술준%조보명%당길%호건국%려합작
Olig2%DNA结合抑制因子4%重组质粒%转染%细胞定位%双分子荧光互补技术
Olig2%DNA結閤抑製因子4%重組質粒%轉染%細胞定位%雙分子熒光互補技術
Olig2%DNA결합억제인자4%중조질립%전염%세포정위%쌍분자형광호보기술
目的 构建pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察Olig2与Id4的相互作用.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增Olig2和Id4基因,分别定向克隆到pBiFC-VN173和pBiFC-VC155载体中,获得pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒.对此2种质粒进行酶切鉴定、测序;用脂质体方法共转染pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4质粒到人结肠癌细胞系SW-1116细胞中,在荧光显微镜下观察Olig2与Id4之间的相互作用.结果 通过酶切鉴定和测序表明成功构建了pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒;该质粒能够有效地共同转染到靶细胞,Olig2和Id4在靶细胞中能够高效表达,并可以相互结合出现BiFC荧光信号,且该信号主要分布于胞质中.结论 成功构建了用于BiFC技术的真核表达载体,并在活细胞内检测到Olig2和Id4分子的相互结合.
目的 構建pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真覈錶達質粒,利用雙分子熒光互補(BiFC)技術,在活細胞內直接觀察Olig2與Id4的相互作用.方法 利用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR),以新生大鼠脊髓RNA為模闆,擴增Olig2和Id4基因,分彆定嚮剋隆到pBiFC-VN173和pBiFC-VC155載體中,穫得pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真覈錶達質粒.對此2種質粒進行酶切鑒定、測序;用脂質體方法共轉染pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4質粒到人結腸癌細胞繫SW-1116細胞中,在熒光顯微鏡下觀察Olig2與Id4之間的相互作用.結果 通過酶切鑒定和測序錶明成功構建瞭pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真覈錶達質粒;該質粒能夠有效地共同轉染到靶細胞,Olig2和Id4在靶細胞中能夠高效錶達,併可以相互結閤齣現BiFC熒光信號,且該信號主要分佈于胞質中.結論 成功構建瞭用于BiFC技術的真覈錶達載體,併在活細胞內檢測到Olig2和Id4分子的相互結閤.
목적 구건pBiFC-VN173-Olig2화pBiFC-VC155-Id4진핵표체질립,이용쌍분자형광호보(BiFC)기술,재활세포내직접관찰Olig2여Id4적상호작용.방법 이용역전록취합매련반응(RT-PCR),이신생대서척수RNA위모판,확증Olig2화Id4기인,분별정향극륭도pBiFC-VN173화pBiFC-VC155재체중,획득pBiFC-VN173-Olig2화pBiFC-VC155-Id4진핵표체질립.대차2충질립진행매절감정、측서;용지질체방법공전염pBiFC-VN173-Olig2화pBiFC-VC155-Id4질립도인결장암세포계SW-1116세포중,재형광현미경하관찰Olig2여Id4지간적상호작용.결과 통과매절감정화측서표명성공구건료pBiFC-VN173-Olig2화pBiFC-VC155-Id4진핵표체질립;해질립능구유효지공동전염도파세포,Olig2화Id4재파세포중능구고효표체,병가이상호결합출현BiFC형광신호,차해신호주요분포우포질중.결론 성공구건료용우BiFC기술적진핵표체재체,병재활세포내검측도Olig2화Id4분자적상호결합.
