CAJ | 학술논문

[目的]对cry基因保守序列进行克隆,并使其在大肠杆菌Rosetta( DE3)中进行表达.[方法]根据NCBI数据库信息设计引物序列,采用PCR技术从抗虫棉基因组DNA中扩增出抗虫基因cry的保守序列,构建重组载体并转化到大肠杆菌Rosetta( DE3)菌株中,利用pGEX原核表达系统诱导蛋白表达.同时,分析了不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响.[结果]扩增出抗虫基因cry的两段保守序列,长度分别为304和853 bp；SDS-PAGE检测结果显示,经IPTG诱导后重组质粒pGEX-4t-1-304和pGEX-4t-1-853成功地表达了大量GST融合蛋白,分子量分别为39和62.4 kDa,与预期结果一致；确定了IPTG最佳诱导浓度为0.15 mmol/L,最佳诱导时间为7h.[结论]为今后检测转Bt基因农作物奠定了基础.
[목적]대cry기인보수서렬진행극륭,병사기재대장간균Rosetta( DE3)중진행표체.[방법]근거NCBI수거고신식설계인물서렬,채용PCR기술종항충면기인조DNA중확증출항충기인cry적보수서렬,구건중조재체병전화도대장간균Rosetta( DE3)균주중,이용pGEX원핵표체계통유도단백표체.동시,분석료불동IPTG농도급불동유도시간대단백표체량적영향.[결과]확증출항충기인cry적량단보수서렬,장도분별위304화853 bp；SDS-PAGE검측결과현시,경IPTG유도후중조질립pGEX-4t-1-304화pGEX-4t-1-853성공지표체료대량GST융합단백,분자량분별위39화62.4 kDa,여예기결과일치；학정료IPTG최가유도농도위0.15 mmol/L,최가유도시간위7h.[결론]위금후검측전Bt기인농작물전정료기출.