湖南医科大学学报
湖南醫科大學學報
호남의과대학학보
BULLETIN OF HUNAN MEDICAL UNIVERSITY
2001年
6期
495-498
,共4页
融合表达%F-box蛋白%亲和层析%基因
融閤錶達%F-box蛋白%親和層析%基因
융합표체%F-box단백%친화층석%기인
采用非定向克隆技术将FBXO30(F-box only prote in 30)基因编码区cDNA序列克隆到哺乳类融合表达载体pEGFP-C2中,通过脂质体转染,将p EGFP-C2/FBX030导入NIH 3T3细胞株,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的表达.采用定向克隆技术将FBXO30基因编码区cDNA序列克隆到表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌.结果显示FBXO30蛋白主要存在于胞浆中.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹均检测到一条约65.5kD左右的新增蛋白泳带.此外,还用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析柱获得了纯化的该融合表达产物.FBXO30蛋白为胞浆蛋白,以可溶性的形式存在,它能在原核表达体系中稳定表达,这对制备其特异性抗体和从蛋白水平研究其功能均具有十分重要的意义.
採用非定嚮剋隆技術將FBXO30(F-box only prote in 30)基因編碼區cDNA序列剋隆到哺乳類融閤錶達載體pEGFP-C2中,通過脂質體轉染,將p EGFP-C2/FBX030導入NIH 3T3細胞株,併在熒光顯微鏡下觀察融閤蛋白的錶達.採用定嚮剋隆技術將FBXO30基因編碼區cDNA序列剋隆到錶達載體pGEX-4T-2中,轉化大腸桿菌.結果顯示FBXO30蛋白主要存在于胞漿中.十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳和免疫印跡均檢測到一條約65.5kD左右的新增蛋白泳帶.此外,還用穀胱甘肽Sepharose 4B親和層析柱穫得瞭純化的該融閤錶達產物.FBXO30蛋白為胞漿蛋白,以可溶性的形式存在,它能在原覈錶達體繫中穩定錶達,這對製備其特異性抗體和從蛋白水平研究其功能均具有十分重要的意義.
채용비정향극륭기술장FBXO30(F-box only prote in 30)기인편마구cDNA서렬극륭도포유류융합표체재체pEGFP-C2중,통과지질체전염,장p EGFP-C2/FBX030도입NIH 3T3세포주,병재형광현미경하관찰융합단백적표체.채용정향극륭기술장FBXO30기인편마구cDNA서렬극륭도표체재체pGEX-4T-2중,전화대장간균.결과현시FBXO30단백주요존재우포장중.십이완기류산납-취병희선알응효전영화면역인적균검측도일조약65.5kD좌우적신증단백영대.차외,환용곡광감태Sepharose 4B친화층석주획득료순화적해융합표체산물.FBXO30단백위포장단백,이가용성적형식존재,타능재원핵표체체계중은정표체,저대제비기특이성항체화종단백수평연구기공능균구유십분중요적의의.
