CAJ | 학술논문

目的:建立肠系膜微淋巴管内皮细胞的培养技术,观察不同体积分数的休克淋巴液对大鼠肠系膜微淋巴管内皮细胞形态的影响.方法:实验于2004-02/07在河北北方学院病理生理学教研室及实验中心细胞培养室完成.选择健康雄性Wistar大鼠,体质量分别为220～300 g和50～80 g.实验方法:①无菌条件下制备大鼠重症失血性休克模型,引流肠系膜淋巴液或收集门静脉血;同时另取大鼠,引流正常淋巴液或正常门静脉血.②从动物种类、培养基、植块方法、胎牛血清浓度等方面对植块培养法进行改良,进行肠系膜微淋巴管内皮细胞原代培养并传代.实验分组:分为6组:胎牛血清组:培养液为DMEM+体积分数为0.1的胎牛血清;正常淋巴液组:培养液为DMEM+正常淋巴液;休克淋巴液组:培养液为DMEM+体积分数为0.04,0.06,0.08,0.10的休克淋巴液;正常血浆组:培养液为DMEM+正常血浆;休克血浆组:培养液为DMEM+休克血浆;无血清对照组:培养液为DMEM.实验评估:①光镜下观察大鼠肠系膜微淋巴管内皮细胞原代培养及传代情况.②光镜、扫描电镜及透射电镜下观察不同体积分数的休克淋巴液及不同作用时间(4,8,12 h)对肠系膜微淋巴管内皮细胞形态及超微结构的影响.结果:①光镜下肠系膜微淋巴管内皮细胞原代培养及传代情况:内皮细胞呈扁平的梭形或多边形,大小均匀,胞核清晰,呈卵圆形.细胞生长融合形成单层后,呈典型的鹅卵石或铺路石样镶嵌状排列生长.②光镜下在休克淋巴液中肠系膜微淋巴管内皮细胞形态:体积分数为0.04的休克淋巴液作用4 h时细胞逐渐收缩、变圆直至脱落漂浮,随着休克淋巴液体积分数增加及作用时间延长,细胞损伤逐渐加重,体积分数为0.08的休克淋巴液作用4 h时核旁出现空泡,体积分数为0.10的休克淋巴液作用12 h时细胞裂解成碎片.其他各组作用12 h肠系膜微淋巴管内皮细胞形态无显著改变.③扫描电镜下在休克淋巴液中肠系膜微淋巴管内皮细胞形态:体积分数为0.04的休克淋巴液作用4 h部分细胞逐渐收缩离壁,细胞间隙增大、细胞边缘的突起拉长、缩短、断裂,作用8,12 h可见凋亡小体.其他各组作用12 h肠系膜微淋巴管内皮细胞形态无显著改变.④透射电镜下在休克淋巴液中肠系膜微淋巴管内皮细胞形态:体积分数为0.04的休克淋巴液作用4 h细胞膜形态不规整,胞浆内质网等膜性细胞器扩张,核形态不规则,作用8 h线粒体呈球形扩张,细胞核逐渐出现固缩、似细胞凋亡改变,核周腔变宽;体积分数为0.08的休克淋巴液作用时间8 h细胞内出现囊泡,内质网不同程度扩张,线粒体主要表现为浓缩、深染等改变,细胞膜边界不清,出现起泡、破碎等现象.其他各组作用12 h肠系膜微淋巴管内皮细胞形态无显著改变.结论:成功建立了肠系膜微淋巴管内皮细胞的培养技术;休克淋巴液可导致肠系膜微淋巴管内皮细胞形态及超微结构损伤. 目的:建立腸繫膜微淋巴管內皮細胞的培養技術,觀察不同體積分數的休剋淋巴液對大鼠腸繫膜微淋巴管內皮細胞形態的影響.方法:實驗于2004-02/07在河北北方學院病理生理學教研室及實驗中心細胞培養室完成.選擇健康雄性Wistar大鼠,體質量分彆為220～300 g和50～80 g.實驗方法:①無菌條件下製備大鼠重癥失血性休剋模型,引流腸繫膜淋巴液或收集門靜脈血;同時另取大鼠,引流正常淋巴液或正常門靜脈血.②從動物種類、培養基、植塊方法、胎牛血清濃度等方麵對植塊培養法進行改良,進行腸繫膜微淋巴管內皮細胞原代培養併傳代.實驗分組:分為6組:胎牛血清組:培養液為DMEM+體積分數為0.1的胎牛血清;正常淋巴液組:培養液為DMEM+正常淋巴液;休剋淋巴液組:培養液為DMEM+體積分數為0.04,0.06,0.08,0.10的休剋淋巴液;正常血漿組:培養液為DMEM+正常血漿;休剋血漿組:培養液為DMEM+休剋血漿;無血清對照組:培養液為DMEM.實驗評估:①光鏡下觀察大鼠腸繫膜微淋巴管內皮細胞原代培養及傳代情況.②光鏡、掃描電鏡及透射電鏡下觀察不同體積分數的休剋淋巴液及不同作用時間(4,8,12 h)對腸繫膜微淋巴管內皮細胞形態及超微結構的影響.結果:①光鏡下腸繫膜微淋巴管內皮細胞原代培養及傳代情況:內皮細胞呈扁平的梭形或多邊形,大小均勻,胞覈清晰,呈卵圓形.細胞生長融閤形成單層後,呈典型的鵝卵石或鋪路石樣鑲嵌狀排列生長.②光鏡下在休剋淋巴液中腸繫膜微淋巴管內皮細胞形態:體積分數為0.04的休剋淋巴液作用4 h時細胞逐漸收縮、變圓直至脫落漂浮,隨著休剋淋巴液體積分數增加及作用時間延長,細胞損傷逐漸加重,體積分數為0.08的休剋淋巴液作用4 h時覈徬齣現空泡,體積分數為0.10的休剋淋巴液作用12 h時細胞裂解成碎片.其他各組作用12 h腸繫膜微淋巴管內皮細胞形態無顯著改變.③掃描電鏡下在休剋淋巴液中腸繫膜微淋巴管內皮細胞形態:體積分數為0.04的休剋淋巴液作用4 h部分細胞逐漸收縮離壁,細胞間隙增大、細胞邊緣的突起拉長、縮短、斷裂,作用8,12 h可見凋亡小體.其他各組作用12 h腸繫膜微淋巴管內皮細胞形態無顯著改變.④透射電鏡下在休剋淋巴液中腸繫膜微淋巴管內皮細胞形態:體積分數為0.04的休剋淋巴液作用4 h細胞膜形態不規整,胞漿內質網等膜性細胞器擴張,覈形態不規則,作用8 h線粒體呈毬形擴張,細胞覈逐漸齣現固縮、似細胞凋亡改變,覈週腔變寬;體積分數為0.08的休剋淋巴液作用時間8 h細胞內齣現囊泡,內質網不同程度擴張,線粒體主要錶現為濃縮、深染等改變,細胞膜邊界不清,齣現起泡、破碎等現象.其他各組作用12 h腸繫膜微淋巴管內皮細胞形態無顯著改變.結論:成功建立瞭腸繫膜微淋巴管內皮細胞的培養技術;休剋淋巴液可導緻腸繫膜微淋巴管內皮細胞形態及超微結構損傷.
목적:건립장계막미림파관내피세포적배양기술,관찰불동체적분수적휴극림파액대대서장계막미림파관내피세포형태적영향.방법:실험우2004-02/07재하북북방학원병리생이학교연실급실험중심세포배양실완성.선택건강웅성Wistar대서,체질량분별위220～300 g화50～80 g.실험방법:①무균조건하제비대서중증실혈성휴극모형,인류장계막림파액혹수집문정맥혈;동시령취대서,인류정상림파액혹정상문정맥혈.②종동물충류、배양기、식괴방법、태우혈청농도등방면대식괴배양법진행개량,진행장계막미림파관내피세포원대배양병전대.실험분조:분위6조:태우혈청조:배양액위DMEM+체적분수위0.1적태우혈청;정상림파액조:배양액위DMEM+정상림파액;휴극림파액조:배양액위DMEM+체적분수위0.04,0.06,0.08,0.10적휴극림파액;정상혈장조:배양액위DMEM+정상혈장;휴극혈장조:배양액위DMEM+휴극혈장;무혈청대조조:배양액위DMEM.실험평고:①광경하관찰대서장계막미림파관내피세포원대배양급전대정황.②광경、소묘전경급투사전경하관찰불동체적분수적휴극림파액급불동작용시간(4,8,12 h)대장계막미림파관내피세포형태급초미결구적영향.결과:①광경하장계막미림파관내피세포원대배양급전대정황:내피세포정편평적사형혹다변형,대소균균,포핵청석,정란원형.세포생장융합형성단층후,정전형적아란석혹포로석양양감상배렬생장.②광경하재휴극림파액중장계막미림파관내피세포형태:체적분수위0.04적휴극림파액작용4 h시세포축점수축、변원직지탈락표부,수착휴극림파액체적분수증가급작용시간연장,세포손상축점가중,체적분수위0.08적휴극림파액작용4 h시핵방출현공포,체적분수위0.10적휴극림파액작용12 h시세포렬해성쇄편.기타각조작용12 h장계막미림파관내피세포형태무현저개변.③소묘전경하재휴극림파액중장계막미림파관내피세포형태:체적분수위0.04적휴극림파액작용4 h부분세포축점수축리벽,세포간극증대、세포변연적돌기랍장、축단、단렬,작용8,12 h가견조망소체.기타각조작용12 h장계막미림파관내피세포형태무현저개변.④투사전경하재휴극림파액중장계막미림파관내피세포형태:체적분수위0.04적휴극림파액작용4 h세포막형태불규정,포장내질망등막성세포기확장,핵형태불규칙,작용8 h선립체정구형확장,세포핵축점출현고축、사세포조망개변,핵주강변관;체적분수위0.08적휴극림파액작용시간8 h세포내출현낭포,내질망불동정도확장,선립체주요표현위농축、심염등개변,세포막변계불청,출현기포、파쇄등현상.기타각조작용12 h장계막미림파관내피세포형태무현저개변.결론:성공건립료장계막미림파관내피세포적배양기술;휴극림파액가도치장계막미림파관내피세포형태급초미결구손상.