CAJ | 학술논문

[目的]从棉花黄萎病真菌Verticillium dahliae中克隆木聚糖酶基因,并在毕赤酵母中进行异源表达,研究酶学性质.[方法]通过多序列比对设计简并引物,扩增出真菌V. dahliae木聚糖酶基因片段,再采用基因组步行PCR技术获得全长木聚糖酶基因序列.经BLAST比对并结合GT-AG原则分析,该基因含有一个大小为63 bp的内含子,利用DpnI介导的缺失方法对含内含子的全长木聚糖酶基因进行剪接,获得该基因的全长cDNA.将克隆到的cDNA在毕赤酵母GS115进行了表达,重组酶经纯化后进行酶学性质分析.[结果]BLAST比对显示,该cDNA推测的氨基酸序列和已知木聚糖酶的最高一致性为72%.测得该酶最适反应温度为45℃,最适反应pH值为6,在pH5-9维持50%以上的活性,对山毛榉材木聚糖具有最好的水解效果.Mg2+和Ca2+对酶有激活作用,分别提高了33.7%和16.6%,EDTA,β-巯基乙醇和NaN3对酶的活性基本没有影响,Tween-80和DMSO使酶活性提高了28.4%和12.8%.[结论]本文从引起棉花黄萎病的真菌V. dahliae中克隆到的木聚糖酶基因是在GenBank上登录的第一个来自棉花黄萎病真菌的木聚糖酶基因序列.本文所用的克隆方法可以高效的从植物病原真菌和白腐真菌克隆只含一个内含子的11家族的新木聚糖酶基因,避免了摸索原始菌株酶表达诱导条件,检测酶的活性等繁琐的操作.酶学性质分析显示该酶在低聚木糖的制备,面包改良上有潜在的应用价值.
[목적]종면화황위병진균Verticillium dahliae중극륭목취당매기인,병재필적효모중진행이원표체,연구매학성질.[방법]통과다서렬비대설계간병인물,확증출진균V. dahliae목취당매기인편단,재채용기인조보행PCR기술획득전장목취당매기인서렬.경BLAST비대병결합GT-AG원칙분석,해기인함유일개대소위63 bp적내함자,이용DpnI개도적결실방법대함내함자적전장목취당매기인진행전접,획득해기인적전장cDNA.장극륭도적cDNA재필적효모GS115진행료표체,중조매경순화후진행매학성질분석.[결과]BLAST비대현시,해cDNA추측적안기산서렬화이지목취당매적최고일치성위72%.측득해매최괄반응온도위45℃,최괄반응pH치위6,재pH5-9유지50%이상적활성,대산모거재목취당구유최호적수해효과.Mg2+화Ca2+대매유격활작용,분별제고료33.7%화16.6%,EDTA,β-구기을순화NaN3대매적활성기본몰유영향,Tween-80화DMSO사매활성제고료28.4%화12.8%.[결론]본문종인기면화황위병적진균V. dahliae중극륭도적목취당매기인시재GenBank상등록적제일개래자면화황위병진균적목취당매기인서렬.본문소용적극륭방법가이고효적종식물병원진균화백부진균극륭지함일개내함자적11가족적신목취당매기인,피면료모색원시균주매표체유도조건,검측매적활성등번쇄적조작.매학성질분석현시해매재저취목당적제비,면포개량상유잠재적응용개치.