复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2009年
3期
307-312
,共6页
赵凤娣%许雅丽%李晓波%殷莲华
趙鳳娣%許雅麗%李曉波%慇蓮華
조봉제%허아려%리효파%은련화
PAPS合成酶1%腺病毒%巨噬细胞%氧化固醇%硫酸化
PAPS閤成酶1%腺病毒%巨噬細胞%氧化固醇%硫痠化
PAPS합성매1%선병독%거서세포%양화고순%류산화
目的 构建携带人PAPS合成酶1(hpapss1)全长cDNA的重组腺病毒,并感染巨噬细胞使PAPSS1过表达,为研究其在胆固醇代谢中的作用提供工具.方法 PCR扩增hpapss1全长cDNA,继而构建了真核表达载体pCDNA3.0-hpapss1,再将hpapss1片段亚克隆入腺病毒穿梭质粒pshuttle-CMV,得到转移质粒pshuttle-CMV-hpapss1,并将其转化含腺病毒基因组质粒pAdEasy-1的BJ5183感受态菌(AdEasier-1 cells).筛选并鉴定重组正确的腺病毒质粒pAdEasy-1-hpapss1,在阳离子脂质体介导下,转染腺病毒包装细胞(293细胞)进行包装和扩增.携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒感染THP-1来源的巨噬细胞48 h后,用Western blot方法测定蛋白水平来确定PAPSS1的过表达.结果 成功制备携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒,滴度为5.3×108 pfu/mL,实现了hpapss1基因在巨噬细胞中的过表达.结论 携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒的成功制备为进一步探讨PAPSS1及氧化固醇硫酸化在巨噬细胞胆固醇代谢平衡中的作用及机制建立了很好的模型和工具.
目的 構建攜帶人PAPS閤成酶1(hpapss1)全長cDNA的重組腺病毒,併感染巨噬細胞使PAPSS1過錶達,為研究其在膽固醇代謝中的作用提供工具.方法 PCR擴增hpapss1全長cDNA,繼而構建瞭真覈錶達載體pCDNA3.0-hpapss1,再將hpapss1片段亞剋隆入腺病毒穿梭質粒pshuttle-CMV,得到轉移質粒pshuttle-CMV-hpapss1,併將其轉化含腺病毒基因組質粒pAdEasy-1的BJ5183感受態菌(AdEasier-1 cells).篩選併鑒定重組正確的腺病毒質粒pAdEasy-1-hpapss1,在暘離子脂質體介導下,轉染腺病毒包裝細胞(293細胞)進行包裝和擴增.攜帶hpapss1全長cDNA的重組腺病毒感染THP-1來源的巨噬細胞48 h後,用Western blot方法測定蛋白水平來確定PAPSS1的過錶達.結果 成功製備攜帶hpapss1全長cDNA的重組腺病毒,滴度為5.3×108 pfu/mL,實現瞭hpapss1基因在巨噬細胞中的過錶達.結論 攜帶hpapss1全長cDNA的重組腺病毒的成功製備為進一步探討PAPSS1及氧化固醇硫痠化在巨噬細胞膽固醇代謝平衡中的作用及機製建立瞭很好的模型和工具.
목적 구건휴대인PAPS합성매1(hpapss1)전장cDNA적중조선병독,병감염거서세포사PAPSS1과표체,위연구기재담고순대사중적작용제공공구.방법 PCR확증hpapss1전장cDNA,계이구건료진핵표체재체pCDNA3.0-hpapss1,재장hpapss1편단아극륭입선병독천사질립pshuttle-CMV,득도전이질립pshuttle-CMV-hpapss1,병장기전화함선병독기인조질립pAdEasy-1적BJ5183감수태균(AdEasier-1 cells).사선병감정중조정학적선병독질립pAdEasy-1-hpapss1,재양리자지질체개도하,전염선병독포장세포(293세포)진행포장화확증.휴대hpapss1전장cDNA적중조선병독감염THP-1래원적거서세포48 h후,용Western blot방법측정단백수평래학정PAPSS1적과표체.결과 성공제비휴대hpapss1전장cDNA적중조선병독,적도위5.3×108 pfu/mL,실현료hpapss1기인재거서세포중적과표체.결론 휴대hpapss1전장cDNA적중조선병독적성공제비위진일보탐토PAPSS1급양화고순류산화재거서세포담고순대사평형중적작용급궤제건립료흔호적모형화공구.
