南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2009年
6期
1094-1097,1110
,共5页
童铁钢%林燕%穆丹梅%白宇%杨木蕾%郑敏%吴东来
童鐵鋼%林燕%穆丹梅%白宇%楊木蕾%鄭敏%吳東來
동철강%림연%목단매%백우%양목뢰%정민%오동래
人Id-2基因%基因表达%多克隆抗体
人Id-2基因%基因錶達%多剋隆抗體
인Id-2기인%기인표체%다극륭항체
目的 在大肠杆菌中表达人Id-2与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人Id-2的多克隆抗体.方法 从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增Id-2基因的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-ld-2蛋白,SDS-PAGE分析表达产物.通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-2融合蛋白,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性,并以此为抗原制备多克隆抗体.结果 经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-2基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量40 000的GST-Id-2融合蛋白.Western-Blot、ELISA和琼脂双向扩散实验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-2特异性反应.结论 Id-2基因在在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体,为检测Id-2及其在各种组织中的表达提供了一种检测方法,也为分析Id-2分子结构及抗原表位奠定了基础.
目的 在大腸桿菌中錶達人Id-2與穀胱甘肽-S轉移酶(GST)的融閤蛋白,併製備抗人Id-2的多剋隆抗體.方法 從乳腺癌組織中提取總RNA,用RT-PCR擴增Id-2基因的編碼序列,剋隆至錶達載體pGEX-6P-1中,重組質粒經PCR、酶切、測序鑒定後,在大腸桿菌中經IPTG誘導錶達穫得GST-ld-2蛋白,SDS-PAGE分析錶達產物.通過親和層析法純化錶達的GST-Id-2融閤蛋白,Western-Blot檢測重組抗原的免疫原性,併以此為抗原製備多剋隆抗體.結果 經PCR、酶切、測序鑒定證明,Id-2基因已正確剋隆至pGEX-6P-1中,經IPTG誘導後,錶達齣相對分子質量40 000的GST-Id-2融閤蛋白.Western-Blot、ELISA和瓊脂雙嚮擴散實驗鑒定所製備的多剋隆抗體可以與GST-Id-2特異性反應.結論 Id-2基因在在大腸桿菌中的成功錶達及製備的多剋隆抗體,為檢測Id-2及其在各種組織中的錶達提供瞭一種檢測方法,也為分析Id-2分子結構及抗原錶位奠定瞭基礎.
목적 재대장간균중표체인Id-2여곡광감태-S전이매(GST)적융합단백,병제비항인Id-2적다극륭항체.방법 종유선암조직중제취총RNA,용RT-PCR확증Id-2기인적편마서렬,극륭지표체재체pGEX-6P-1중,중조질립경PCR、매절、측서감정후,재대장간균중경IPTG유도표체획득GST-ld-2단백,SDS-PAGE분석표체산물.통과친화층석법순화표체적GST-Id-2융합단백,Western-Blot검측중조항원적면역원성,병이차위항원제비다극륭항체.결과 경PCR、매절、측서감정증명,Id-2기인이정학극륭지pGEX-6P-1중,경IPTG유도후,표체출상대분자질량40 000적GST-Id-2융합단백.Western-Blot、ELISA화경지쌍향확산실험감정소제비적다극륭항체가이여GST-Id-2특이성반응.결론 Id-2기인재재대장간균중적성공표체급제비적다극륭항체,위검측Id-2급기재각충조직중적표체제공료일충검측방법,야위분석Id-2분자결구급항원표위전정료기출.
