CAJ | 학술논문

根据剑尾鱼Xiphophorus helleri IgM和β-actin基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从注射免疫后的剑尾鱼头肾中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定.将所得标准品质粒以10倍梯度进行稀释,采用SYBR Green I 染料进行荧光定量扩增,构建标准曲线并进行融解曲线分析.结果表明:构建的剑尾鱼IgM和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为7～21和8～25,扩增效率分别为2.025、1.970;融解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,其Tm值分别为82.43 ℃、86.09 ℃,表明扩增产物特异性非常好.本实验中建立的剑尾鱼IgM基因实时荧光定量PCR方法可用于对剑尾鱼IgM基因的转录水平进行测定.
근거검미어Xiphophorus helleri IgM화β-actin기인서렬,분별재보수구역설계병합성인물,종주사면역후적검미어두신중제취총RNA역전록합성cDNA,대목적편단진행PCR확증、전영순화、T-A극륭급측서감정.장소득표준품질립이10배제도진행희석,채용SYBR Green I 염료진행형광정량확증,구건표준곡선병진행융해곡선분석.결과표명:구건적검미어IgM화β-actin기인적표준품Ct치검측범위분별위7～21화8～25,확증효솔분별위2.025、1.970;융해곡선분석결과현시구유특이적단개봉,기Tm치분별위82.43 ℃、86.09 ℃,표명확증산물특이성비상호.본실험중건립적검미어IgM기인실시형광정량PCR방법가용우대검미어IgM기인적전록수평진행측정.