华西口腔医学杂志
華西口腔醫學雜誌
화서구강의학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY
2010年
3期
241-245
,共5页
李昂%谢红帼%梁平%朱春晖%石建峰%饶国洲%苟建重
李昂%謝紅幗%樑平%硃春暉%石建峰%饒國洲%茍建重
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牙龈卟啉单胞菌%菌毛蛋白A%融合表达
牙齦卟啉單胞菌%菌毛蛋白A%融閤錶達
아간계람단포균%균모단백A%융합표체
目的 克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因,构建原核表达载体,诱导其在大肠杆菌中融合表达,并鉴定、纯化其表达产物.方法 克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因,构建表达载体pET15b-FimA,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyS感受态细胞;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,以抗6×His Tag单克隆抗体为一抗,Western blot鉴定、Co2+柱亲和层析纯化融合蛋白.结果 克隆的FimA基因序列及插入表达载体中的FimA序列均与GenBank数据库中的序列呈现100%同源性;IPTG诱导后Western blot鉴定4.1×104处有目的 蛋白表达;Co2+亲和层析法获得纯化的高浓度FimA蛋白.结论 本实验成功构建了牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因的原核表达载体pET15b-FimA,并在大肠杆菌中获得成功表达和纯化,为进一步制备牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白单克隆抗体和研制开发预防牙周炎的亚单位蛋白疫苗奠定了实验基础.
目的 剋隆牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白FimA基因,構建原覈錶達載體,誘導其在大腸桿菌中融閤錶達,併鑒定、純化其錶達產物.方法 剋隆牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白FimA基因,構建錶達載體pET15b-FimA,轉化大腸桿菌BL21(DE3)pLyS感受態細胞;異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達融閤蛋白,以抗6×His Tag單剋隆抗體為一抗,Western blot鑒定、Co2+柱親和層析純化融閤蛋白.結果 剋隆的FimA基因序列及插入錶達載體中的FimA序列均與GenBank數據庫中的序列呈現100%同源性;IPTG誘導後Western blot鑒定4.1×104處有目的 蛋白錶達;Co2+親和層析法穫得純化的高濃度FimA蛋白.結論 本實驗成功構建瞭牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白FimA基因的原覈錶達載體pET15b-FimA,併在大腸桿菌中穫得成功錶達和純化,為進一步製備牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白單剋隆抗體和研製開髮預防牙週炎的亞單位蛋白疫苗奠定瞭實驗基礎.
목적 극륭아간계람단포균균모단백FimA기인,구건원핵표체재체,유도기재대장간균중융합표체,병감정、순화기표체산물.방법 극륭아간계람단포균균모단백FimA기인,구건표체재체pET15b-FimA,전화대장간균BL21(DE3)pLyS감수태세포;이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체융합단백,이항6×His Tag단극륭항체위일항,Western blot감정、Co2+주친화층석순화융합단백.결과 극륭적FimA기인서렬급삽입표체재체중적FimA서렬균여GenBank수거고중적서렬정현100%동원성;IPTG유도후Western blot감정4.1×104처유목적 단백표체;Co2+친화층석법획득순화적고농도FimA단백.결론 본실험성공구건료아간계람단포균균모단백FimA기인적원핵표체재체pET15b-FimA,병재대장간균중획득성공표체화순화,위진일보제비아간계람단포균균모단백단극륭항체화연제개발예방아주염적아단위단백역묘전정료실험기출.
