质谱学报
質譜學報
질보학보
2010年
6期
326-330
,共5页
张俊杰%张立坚%刘春安%张良滔%蔡春
張俊傑%張立堅%劉春安%張良滔%蔡春
장준걸%장립견%류춘안%장량도%채춘
DNA甲基化%液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)%胞嘧啶%5-甲基胞嘧啶
DNA甲基化%液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)%胞嘧啶%5-甲基胞嘧啶
DNA갑기화%액상색보-천련질보(LC-MS/MS)%포밀정%5-갑기포밀정
建立液相色谱-串联质谱测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法.采用苯酚氯仿提取组织DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作内标,经N2吹干后,用甲醇溶解,以液相色谱-串联质谱检测胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的含量,并计算全基因组中DNA甲基化的水平.结果表明,胞嘧啶的线性范围为1～100μg·L-1,相关系数为0.997 4,相对标准偏差为0.70%～4.09%;5-甲基胞嘧啶的线性范围为1～50μg·L-1,相关系数为0.994 8,相对标准偏差为0.60%～4.81%.胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为1 Pg,日内相对标准偏差为1.86%～4.67%,日间相对标准偏差为3.72%～4.68%,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的加样回收率为86.52%～105.14%.本研究所建立的方法检测组织中DNA甲基化程度,具有专一性强、操作简便的优点,能较好的满足全基因组DNA甲基化检测的要求.
建立液相色譜-串聯質譜測定組織中全基因組DNA甲基化水平的方法.採用苯酚氯倣提取組織DNA,提取的DNA用88%甲痠在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作內標,經N2吹榦後,用甲醇溶解,以液相色譜-串聯質譜檢測胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的含量,併計算全基因組中DNA甲基化的水平.結果錶明,胞嘧啶的線性範圍為1～100μg·L-1,相關繫數為0.997 4,相對標準偏差為0.70%～4.09%;5-甲基胞嘧啶的線性範圍為1～50μg·L-1,相關繫數為0.994 8,相對標準偏差為0.60%～4.81%.胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的檢齣限為1 Pg,日內相對標準偏差為1.86%～4.67%,日間相對標準偏差為3.72%～4.68%,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的加樣迴收率為86.52%～105.14%.本研究所建立的方法檢測組織中DNA甲基化程度,具有專一性彊、操作簡便的優點,能較好的滿足全基因組DNA甲基化檢測的要求.
건립액상색보-천련질보측정조직중전기인조DNA갑기화수평적방법.채용분분록방제취조직DNA,제취적DNA용88%갑산재140℃하렬해,DNA렬해액가입동위소포밀정작내표,경N2취간후,용갑순용해,이액상색보-천련질보검측포밀정화5-갑기포밀정적함량,병계산전기인조중DNA갑기화적수평.결과표명,포밀정적선성범위위1～100μg·L-1,상관계수위0.997 4,상대표준편차위0.70%～4.09%;5-갑기포밀정적선성범위위1～50μg·L-1,상관계수위0.994 8,상대표준편차위0.60%～4.81%.포밀정화5-갑기포밀정적검출한위1 Pg,일내상대표준편차위1.86%～4.67%,일간상대표준편차위3.72%～4.68%,포밀정화5-갑기포밀정적가양회수솔위86.52%～105.14%.본연구소건립적방법검측조직중DNA갑기화정도,구유전일성강、조작간편적우점,능교호적만족전기인조DNA갑기화검측적요구.
