南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
6期
760-765
,共6页
董金凯%高江平%阎瑾琦%张亮%肖毅%王伟%王晓雄%于继云
董金凱%高江平%閻瑾琦%張亮%肖毅%王偉%王曉雄%于繼雲
동금개%고강평%염근기%장량%초의%왕위%왕효웅%우계운
肿瘤%免疫基因治疗%IL-12%GM-CSF%B7.1%电穿孔%体内外表达
腫瘤%免疫基因治療%IL-12%GM-CSF%B7.1%電穿孔%體內外錶達
종류%면역기인치료%IL-12%GM-CSF%B7.1%전천공%체내외표체
目的 构建能够同时表达人免疫调节因子IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-1L- 12-GB,验证以上免疫调节因子基因在293T细胞的表达以及IL-12基因在活体内的表达.方法 将人1L-12基因克隆到早期构建好的pVAX-IRES-GM-CSF-B7.1真核表达质粒的上游,将其构建成为pVAX-IL-12-GB重组质粒:利用脂质体法瞬时转染293T细胞,RT-PCR检测IL-12和GM-CSF-B7,1基因的转录,ELISA法检测细胞上清中上游IL-12基因和下游GM-CSF基因的蛋白表达,流式细胞术及免疫荧光检测下游B7.1基因的表达；利用电穿孔方法递送质粒进入小鼠股四头肌,免疫组化法检测IL-12基因在小鼠活体内的表达情况.结果 双酶切以及PCR鉴定获得的片段均与预期的片段大小一致,测序分析证实IL-12基因序列完全正确；瞬时转染293T细胞后,分别验证了人IL-12,GM-CSF和B7.1基因的mRNA转录和蛋白表达；电穿孔递送质粒后,活体肌肉组织内同样可以检测到IL-12基因的表达.结论 成功构建了可以同时表达人IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂,为下一步开展肿瘤免疫基因治疗研究奠定了坚实的基础.
目的 構建能夠同時錶達人免疫調節因子IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗腫瘤免疫基因治療劑pVAX-1L- 12-GB,驗證以上免疫調節因子基因在293T細胞的錶達以及IL-12基因在活體內的錶達.方法 將人1L-12基因剋隆到早期構建好的pVAX-IRES-GM-CSF-B7.1真覈錶達質粒的上遊,將其構建成為pVAX-IL-12-GB重組質粒:利用脂質體法瞬時轉染293T細胞,RT-PCR檢測IL-12和GM-CSF-B7,1基因的轉錄,ELISA法檢測細胞上清中上遊IL-12基因和下遊GM-CSF基因的蛋白錶達,流式細胞術及免疫熒光檢測下遊B7.1基因的錶達；利用電穿孔方法遞送質粒進入小鼠股四頭肌,免疫組化法檢測IL-12基因在小鼠活體內的錶達情況.結果 雙酶切以及PCR鑒定穫得的片段均與預期的片段大小一緻,測序分析證實IL-12基因序列完全正確；瞬時轉染293T細胞後,分彆驗證瞭人IL-12,GM-CSF和B7.1基因的mRNA轉錄和蛋白錶達；電穿孔遞送質粒後,活體肌肉組織內同樣可以檢測到IL-12基因的錶達.結論 成功構建瞭可以同時錶達人IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗腫瘤免疫基因治療劑,為下一步開展腫瘤免疫基因治療研究奠定瞭堅實的基礎.
목적 구건능구동시표체인면역조절인자IL-12,GM-CSF화B7.1적신형항종류면역기인치료제pVAX-1L- 12-GB,험증이상면역조절인자기인재293T세포적표체이급IL-12기인재활체내적표체.방법 장인1L-12기인극륭도조기구건호적pVAX-IRES-GM-CSF-B7.1진핵표체질립적상유,장기구건성위pVAX-IL-12-GB중조질립:이용지질체법순시전염293T세포,RT-PCR검측IL-12화GM-CSF-B7,1기인적전록,ELISA법검측세포상청중상유IL-12기인화하유GM-CSF기인적단백표체,류식세포술급면역형광검측하유B7.1기인적표체；이용전천공방법체송질립진입소서고사두기,면역조화법검측IL-12기인재소서활체내적표체정황.결과 쌍매절이급PCR감정획득적편단균여예기적편단대소일치,측서분석증실IL-12기인서렬완전정학；순시전염293T세포후,분별험증료인IL-12,GM-CSF화B7.1기인적mRNA전록화단백표체；전천공체송질립후,활체기육조직내동양가이검측도IL-12기인적표체.결론 성공구건료가이동시표체인IL-12,GM-CSF화B7.1적신형항종류면역기인치료제,위하일보개전종류면역기인치료연구전정료견실적기출.
