中国草地学报
中國草地學報
중국초지학보
CHINESE JOURNAL OF GRASSLAND
2012年
4期
15-20
,共6页
李钰莹%董宽虎%王若梦%杨静芳
李鈺瑩%董寬虎%王若夢%楊靜芳
리옥형%동관호%왕약몽%양정방
白羊草%ISSR%PCR反应体系%优化
白羊草%ISSR%PCR反應體繫%優化
백양초%ISSR%PCR반응체계%우화
采用正交试验与单因素、双因素设计结合的方法,对白羊草ISSR PCR反应体系的Mg2、dNTP、模板DNA、Taq DNA聚合酶及引物5种主要因素进行优化.确立了白羊草最佳反应体系及扩增程序:25μL体系中dNTP 0.2mmol/L、Taq酶1.0U、引物0.6μmol/L、Mg2-2.5 mmol/L、DNA模板30ng、10×PCR Buffer 2.5μL;扩增程序:94℃预变性5min,94℃变性45 s,50～60℃(退火温度随引物不同而定)退火60s,72℃延伸90s,共35个循环,72℃后延伸5min.
採用正交試驗與單因素、雙因素設計結閤的方法,對白羊草ISSR PCR反應體繫的Mg2、dNTP、模闆DNA、Taq DNA聚閤酶及引物5種主要因素進行優化.確立瞭白羊草最佳反應體繫及擴增程序:25μL體繫中dNTP 0.2mmol/L、Taq酶1.0U、引物0.6μmol/L、Mg2-2.5 mmol/L、DNA模闆30ng、10×PCR Buffer 2.5μL;擴增程序:94℃預變性5min,94℃變性45 s,50～60℃(退火溫度隨引物不同而定)退火60s,72℃延伸90s,共35箇循環,72℃後延伸5min.
채용정교시험여단인소、쌍인소설계결합적방법,대백양초ISSR PCR반응체계적Mg2、dNTP、모판DNA、Taq DNA취합매급인물5충주요인소진행우화.학립료백양초최가반응체계급확증정서:25μL체계중dNTP 0.2mmol/L、Taq매1.0U、인물0.6μmol/L、Mg2-2.5 mmol/L、DNA모판30ng、10×PCR Buffer 2.5μL;확증정서:94℃예변성5min,94℃변성45 s,50～60℃(퇴화온도수인물불동이정)퇴화60s,72℃연신90s,공35개순배,72℃후연신5min.
