CAJ | 학술논문

目的:观察淀粉样β蛋白对小胶质细胞活性、形态学以及分泌炎性细胞因子的作用,为阿尔茨海默病的炎性反应机制及抗炎治疗提供体外依据.方法:实验于2003-03/2004-03在解放军总医院老年医学研究所进行.应用BV-2细胞作为体外小胶质细胞模型,加入不同浓度淀粉样β蛋白25～35或1～42(5,10,20,40,60μmol/L)及20μmol/L不同孵育状态(37℃孵育3,6,12,24h、3,5和7d)的淀粉样β蛋白25～35或1～42分别培养2～24 h.四唑盐法检测淀粉样β蛋白对细胞活性的影响,倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,并应用放射免疫法测定加入淀粉样β蛋白后BV-2细胞上清白细胞介素1 β及白细胞介素6水平.结果:①细胞活性:淀粉样β蛋白对BV-2细胞的生存活性没有影响(P均＞0.05).②细胞形态学改变:在较低浓度时(5～10μmo1/L)淀粉样β蛋白1～42就可以使BV-2细胞出现明显的形态学改变(多数细胞聚集成团,有的胞体变得肥大,胞核大而圆,核仁明显;有的胞体变为梭形,由胞体伸出一个或多个较长的枝状突起),与淀粉样β蛋白1～42孵育状态有关(37℃孵育5～7 d时最为明显),而淀粉样β蛋白25～35无此作用.③白细胞介素1 β水平:淀粉样β蛋白1～42与25～35均可以刺激BV-2细胞分泌,二者作用类似.20μmol/L淀粉样β蛋白作用6 h后其水平升高,至12 h达到高峰,约为对照组的3倍,此后逐渐下降(P＜0.01).当不同浓度淀粉样β蛋白作用12 h时,淀粉样β蛋白为20 μmol/L时在上清中可以检测到白细胞介素1β明显增加,此后随着浓度的增加其分泌也逐渐增加,至60 μmol/L时为对照组的5倍(P＜0.01).④白细胞介素6水平:各淀粉样β蛋白处理组细胞上清液均不能检测到其水平有明显变化.结论:淀粉样β蛋白对BV-2细胞的生存活性没有影响,淀粉样β蛋白可以激活BV-2细胞发生形态学改变并释放炎性细胞因子,但二者的作用途径不同,形态学改变与淀粉样β蛋白片段及聚集状态均有关;而分泌白细胞介素1β与淀粉样β蛋白片段及聚集状态均无关,并且这种刺激作用具有时间以及浓度依赖性. 目的:觀察澱粉樣β蛋白對小膠質細胞活性、形態學以及分泌炎性細胞因子的作用,為阿爾茨海默病的炎性反應機製及抗炎治療提供體外依據.方法:實驗于2003-03/2004-03在解放軍總醫院老年醫學研究所進行.應用BV-2細胞作為體外小膠質細胞模型,加入不同濃度澱粉樣β蛋白25～35或1～42(5,10,20,40,60μmol/L)及20μmol/L不同孵育狀態(37℃孵育3,6,12,24h、3,5和7d)的澱粉樣β蛋白25～35或1～42分彆培養2～24 h.四唑鹽法檢測澱粉樣β蛋白對細胞活性的影響,倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態學改變,併應用放射免疫法測定加入澱粉樣β蛋白後BV-2細胞上清白細胞介素1 β及白細胞介素6水平.結果:①細胞活性:澱粉樣β蛋白對BV-2細胞的生存活性沒有影響(P均＞0.05).②細胞形態學改變:在較低濃度時(5～10μmo1/L)澱粉樣β蛋白1～42就可以使BV-2細胞齣現明顯的形態學改變(多數細胞聚集成糰,有的胞體變得肥大,胞覈大而圓,覈仁明顯;有的胞體變為梭形,由胞體伸齣一箇或多箇較長的枝狀突起),與澱粉樣β蛋白1～42孵育狀態有關(37℃孵育5～7 d時最為明顯),而澱粉樣β蛋白25～35無此作用.③白細胞介素1 β水平:澱粉樣β蛋白1～42與25～35均可以刺激BV-2細胞分泌,二者作用類似.20μmol/L澱粉樣β蛋白作用6 h後其水平升高,至12 h達到高峰,約為對照組的3倍,此後逐漸下降(P＜0.01).噹不同濃度澱粉樣β蛋白作用12 h時,澱粉樣β蛋白為20 μmol/L時在上清中可以檢測到白細胞介素1β明顯增加,此後隨著濃度的增加其分泌也逐漸增加,至60 μmol/L時為對照組的5倍(P＜0.01).④白細胞介素6水平:各澱粉樣β蛋白處理組細胞上清液均不能檢測到其水平有明顯變化.結論:澱粉樣β蛋白對BV-2細胞的生存活性沒有影響,澱粉樣β蛋白可以激活BV-2細胞髮生形態學改變併釋放炎性細胞因子,但二者的作用途徑不同,形態學改變與澱粉樣β蛋白片段及聚集狀態均有關;而分泌白細胞介素1β與澱粉樣β蛋白片段及聚集狀態均無關,併且這種刺激作用具有時間以及濃度依賴性.
목적:관찰정분양β단백대소효질세포활성、형태학이급분비염성세포인자적작용,위아이자해묵병적염성반응궤제급항염치료제공체외의거.방법:실험우2003-03/2004-03재해방군총의원노년의학연구소진행.응용BV-2세포작위체외소효질세포모형,가입불동농도정분양β단백25～35혹1～42(5,10,20,40,60μmol/L)급20μmol/L불동부육상태(37℃부육3,6,12,24h、3,5화7d)적정분양β단백25～35혹1～42분별배양2～24 h.사서염법검측정분양β단백대세포활성적영향,도치상차현미경하관찰세포형태학개변,병응용방사면역법측정가입정분양β단백후BV-2세포상청백세포개소1 β급백세포개소6수평.결과:①세포활성:정분양β단백대BV-2세포적생존활성몰유영향(P균＞0.05).②세포형태학개변:재교저농도시(5～10μmo1/L)정분양β단백1～42취가이사BV-2세포출현명현적형태학개변(다수세포취집성단,유적포체변득비대,포핵대이원,핵인명현;유적포체변위사형,유포체신출일개혹다개교장적지상돌기),여정분양β단백1～42부육상태유관(37℃부육5～7 d시최위명현),이정분양β단백25～35무차작용.③백세포개소1 β수평:정분양β단백1～42여25～35균가이자격BV-2세포분비,이자작용유사.20μmol/L정분양β단백작용6 h후기수평승고,지12 h체도고봉,약위대조조적3배,차후축점하강(P＜0.01).당불동농도정분양β단백작용12 h시,정분양β단백위20 μmol/L시재상청중가이검측도백세포개소1β명현증가,차후수착농도적증가기분비야축점증가,지60 μmol/L시위대조조적5배(P＜0.01).④백세포개소6수평:각정분양β단백처리조세포상청액균불능검측도기수평유명현변화.결론:정분양β단백대BV-2세포적생존활성몰유영향,정분양β단백가이격활BV-2세포발생형태학개변병석방염성세포인자,단이자적작용도경불동,형태학개변여정분양β단백편단급취집상태균유관;이분비백세포개소1β여정분양β단백편단급취집상태균무관,병차저충자격작용구유시간이급농도의뢰성.