细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2006年
6期
873-878
,共6页
匡颖%梁斌%麻孙恺%王珏%费俭%王铸钢%毛积芳
劻穎%樑斌%痳孫愷%王玨%費儉%王鑄鋼%毛積芳
광영%량빈%마손개%왕각%비검%왕주강%모적방
猿猴病毒40大T抗原基因%大鼠神经元特异性烯醇化酶基因启动子%转基因小鼠%神经系统肿瘤
猿猴病毒40大T抗原基因%大鼠神經元特異性烯醇化酶基因啟動子%轉基因小鼠%神經繫統腫瘤
원후병독40대T항원기인%대서신경원특이성희순화매기인계동자%전기인소서%신경계통종류
为了建立中枢神经系统肿瘤小鼠模型,构建了大鼠神经元特异性烯醇化酶(rat neuron-specific enolase,NSE)基因启动子调控下的猿猴病毒40大T抗原基因(simian virus 40 large Tantigen gene,SV40 TAg)转基因载体,通过受精卵雄原核显微注射的方法制备转基因小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因型;RT-PCR和Northern印迹检测转基因阳性鼠中SV40 TAg RNA水平的表达及其组织特异性;免疫组化检测其蛋白质水平的表达.经显微注射共获得9只首代转基因阳性鼠(首建者,Founder小鼠),其中2例出生时即发生神经干细胞来源的肿瘤,其他Founder小鼠经繁育后共建立了5个SV40 TAg转基因小鼠系,其中有4个系检测到SV40 TAg RNA水平的表达且特异性地表达于脑组织,但未检测到蛋白质水平的表达.研究表明NSE启动子活性具有较强的组织特异性,并起始于小鼠胚胎发育期;SV40 TAg具有明显的致癌作用,且SV40 TAg诱发的神经系统肿瘤易造成转基因小鼠早期死亡.
為瞭建立中樞神經繫統腫瘤小鼠模型,構建瞭大鼠神經元特異性烯醇化酶(rat neuron-specific enolase,NSE)基因啟動子調控下的猿猴病毒40大T抗原基因(simian virus 40 large Tantigen gene,SV40 TAg)轉基因載體,通過受精卵雄原覈顯微註射的方法製備轉基因小鼠.PCR鑒定轉基因小鼠的基因型;RT-PCR和Northern印跡檢測轉基因暘性鼠中SV40 TAg RNA水平的錶達及其組織特異性;免疫組化檢測其蛋白質水平的錶達.經顯微註射共穫得9隻首代轉基因暘性鼠(首建者,Founder小鼠),其中2例齣生時即髮生神經榦細胞來源的腫瘤,其他Founder小鼠經繁育後共建立瞭5箇SV40 TAg轉基因小鼠繫,其中有4箇繫檢測到SV40 TAg RNA水平的錶達且特異性地錶達于腦組織,但未檢測到蛋白質水平的錶達.研究錶明NSE啟動子活性具有較彊的組織特異性,併起始于小鼠胚胎髮育期;SV40 TAg具有明顯的緻癌作用,且SV40 TAg誘髮的神經繫統腫瘤易造成轉基因小鼠早期死亡.
위료건립중추신경계통종류소서모형,구건료대서신경원특이성희순화매(rat neuron-specific enolase,NSE)기인계동자조공하적원후병독40대T항원기인(simian virus 40 large Tantigen gene,SV40 TAg)전기인재체,통과수정란웅원핵현미주사적방법제비전기인소서.PCR감정전기인소서적기인형;RT-PCR화Northern인적검측전기인양성서중SV40 TAg RNA수평적표체급기조직특이성;면역조화검측기단백질수평적표체.경현미주사공획득9지수대전기인양성서(수건자,Founder소서),기중2례출생시즉발생신경간세포래원적종류,기타Founder소서경번육후공건립료5개SV40 TAg전기인소서계,기중유4개계검측도SV40 TAg RNA수평적표체차특이성지표체우뇌조직,단미검측도단백질수평적표체.연구표명NSE계동자활성구유교강적조직특이성,병기시우소서배태발육기;SV40 TAg구유명현적치암작용,차SV40 TAg유발적신경계통종류역조성전기인소서조기사망.
