癌变·畸变·突变
癌變·畸變·突變
암변·기변·돌변
CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
2009年
1期
36-41
,共6页
陈昌杰%章菊%刘臣彪%杨清玲%滕凤猛%王惠
陳昌傑%章菊%劉臣彪%楊清玲%滕鳳猛%王惠
진창걸%장국%류신표%양청령%등봉맹%왕혜
小干扰RNA%TrKA%乳腺癌MCF-7细胞
小榦擾RNA%TrKA%乳腺癌MCF-7細胞
소간우RNA%TrKA%유선암MCF-7세포
背景与目的:构建TrKA特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对神经生长因子(NGF)促细胞增殖作用和对细胞周期的影响.材料与方法:通过Genbank提供的TrKA基因mRNA全序列,应用设计软件选择设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与PsilencerTM 4.1-CMV reo质粒载体连接,经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染乳腺癌MCF-7细胞.利用G418筛选稳定表达TrKA-siRNA的MCF-7细胞株,通过Real-time PCR、Western blot和免疫组化在mRNA和蛋白水平检测TrKA的表达水平.MTT法检测TrKA干扰后NGF对细胞增殖作用的影响.流式细胞术观察细胞周期的变化.结果:序列测定表明成功构建TrKA-siRNA表达载体,Real-time PER显示TrKA mRNA下调74.7%(P＜0.05),Western blot显示蛋白表达下降80.5%,免疫组化结果也显示TrKA蛋白表达下降.试剂盒提供阳性对照GAPDH基因其表达水平下降85.0%(P＜0.05).MTT检测显示,NGF组细胞增殖反应均较NGF+siRNA组、siRNA组和对照组明显升高(P＜0.05),NGF+siRNA组的细胞增殖反应较其余各组下降(P＜0.05),表明TrKA干扰能有效抑制NGF诱导的乳腺癌细胞MCF-7的增殖.流式细胞术检测细胞周期结果显示:与对照组相比,NGF+siRNA组和siRNA组细胞G0/G1期增加,S期减少(P＜0.05),细胞周期阻滞于Go/G,期.结论:TrKA特异siRNA表达载体有效下调TrKA基因的表达,并抑制NGF引起的细胞增殖效应.
揹景與目的:構建TrKA特異小榦擾RNA(siRNA)錶達載體,併觀察其對神經生長因子(NGF)促細胞增殖作用和對細胞週期的影響.材料與方法:通過Genbank提供的TrKA基因mRNA全序列,應用設計軟件選擇設計能轉錄短髮夾狀RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,併與PsilencerTM 4.1-CMV reo質粒載體連接,經DNA測序鑒定重組體DNA序列正確後轉染乳腺癌MCF-7細胞.利用G418篩選穩定錶達TrKA-siRNA的MCF-7細胞株,通過Real-time PCR、Western blot和免疫組化在mRNA和蛋白水平檢測TrKA的錶達水平.MTT法檢測TrKA榦擾後NGF對細胞增殖作用的影響.流式細胞術觀察細胞週期的變化.結果:序列測定錶明成功構建TrKA-siRNA錶達載體,Real-time PER顯示TrKA mRNA下調74.7%(P＜0.05),Western blot顯示蛋白錶達下降80.5%,免疫組化結果也顯示TrKA蛋白錶達下降.試劑盒提供暘性對照GAPDH基因其錶達水平下降85.0%(P＜0.05).MTT檢測顯示,NGF組細胞增殖反應均較NGF+siRNA組、siRNA組和對照組明顯升高(P＜0.05),NGF+siRNA組的細胞增殖反應較其餘各組下降(P＜0.05),錶明TrKA榦擾能有效抑製NGF誘導的乳腺癌細胞MCF-7的增殖.流式細胞術檢測細胞週期結果顯示:與對照組相比,NGF+siRNA組和siRNA組細胞G0/G1期增加,S期減少(P＜0.05),細胞週期阻滯于Go/G,期.結論:TrKA特異siRNA錶達載體有效下調TrKA基因的錶達,併抑製NGF引起的細胞增殖效應.
배경여목적:구건TrKA특이소간우RNA(siRNA)표체재체,병관찰기대신경생장인자(NGF)촉세포증식작용화대세포주기적영향.재료여방법:통과Genbank제공적TrKA기인mRNA전서렬,응용설계연건선택설계능전록단발협상RNA(short hairpin RNAs,shRNA)적DNA서렬,병여PsilencerTM 4.1-CMV reo질립재체련접,경DNA측서감정중조체DNA서렬정학후전염유선암MCF-7세포.이용G418사선은정표체TrKA-siRNA적MCF-7세포주,통과Real-time PCR、Western blot화면역조화재mRNA화단백수평검측TrKA적표체수평.MTT법검측TrKA간우후NGF대세포증식작용적영향.류식세포술관찰세포주기적변화.결과:서렬측정표명성공구건TrKA-siRNA표체재체,Real-time PER현시TrKA mRNA하조74.7%(P＜0.05),Western blot현시단백표체하강80.5%,면역조화결과야현시TrKA단백표체하강.시제합제공양성대조GAPDH기인기표체수평하강85.0%(P＜0.05).MTT검측현시,NGF조세포증식반응균교NGF+siRNA조、siRNA조화대조조명현승고(P＜0.05),NGF+siRNA조적세포증식반응교기여각조하강(P＜0.05),표명TrKA간우능유효억제NGF유도적유선암세포MCF-7적증식.류식세포술검측세포주기결과현시:여대조조상비,NGF+siRNA조화siRNA조세포G0/G1기증가,S기감소(P＜0.05),세포주기조체우Go/G,기.결론:TrKA특이siRNA표체재체유효하조TrKA기인적표체,병억제NGF인기적세포증식효응.
