CAJ | 학술논문

[目的]将链替代扩增技术与核酸修饰纳米金积聚变色的光学特性相结合,设计了一种新型的直观检测3′端暴露单链核酸的方法,实现对单链核酸的高灵敏度检测.[方法]设计一条含有硫代修饰酶切位点的单链核酸(ZDNA),其酶切位点5′端是能将核酸修饰纳米金变色的Linker序列,3′端是能与Target单链核酸3′端完全互补的H序列.当无Target存在时,Linker会充分暴露,能使核酸修饰纳米金积聚呈现紫色;但是当Target存在时,会与H序列完全互补,作为ZDNA的引物进入链替代扩增循环,形成的新链不断与Linker序列互补,不能使核酸修饰纳米金积聚呈现红色,从而间接检测了Target单链核酸.[结果]通过一系列试验确定检测体系,具体为:40 μl修饰纳米金溶液(0.52 nmol/L)加入10 μl酶循环体系(ZDNA 20 nmol/L,33 mmol/L Tris-HCl(pH值7.9);10 mmol/L MgCl2;66 mmol/L NaCl;0.5 mmol/L dNTP;0.1 mg/ml BSA;0.05 U/μl klenow;1 U/μl Hinc II),直观或紫外检测并绘制Target浓度与纳米金积聚程度的标准曲线, 表明Target浓度在1～200 pmol/L的范围内呈现良好的线性关系,R2=0.946,最低检测限是1 pmol/L.[结论]链替代扩增-纳米金比色检测单链核酸方法简便、直观、成本低,与传统修饰纳米金比色检测DNA方法相比,灵敏度提高了104倍.
[목적]장련체대확증기술여핵산수식납미금적취변색적광학특성상결합,설계료일충신형적직관검측3′단폭로단련핵산적방법,실현대단련핵산적고령민도검측.[방법]설계일조함유류대수식매절위점적단련핵산(ZDNA),기매절위점5′단시능장핵산수식납미금변색적Linker서렬,3′단시능여Target단련핵산3′단완전호보적H서렬.당무Target존재시,Linker회충분폭로,능사핵산수식납미금적취정현자색;단시당Target존재시,회여H서렬완전호보,작위ZDNA적인물진입련체대확증순배,형성적신련불단여Linker서렬호보,불능사핵산수식납미금적취정현홍색,종이간접검측료Target단련핵산.[결과]통과일계렬시험학정검측체계,구체위:40 μl수식납미금용액(0.52 nmol/L)가입10 μl매순배체계(ZDNA 20 nmol/L,33 mmol/L Tris-HCl(pH치7.9);10 mmol/L MgCl2;66 mmol/L NaCl;0.5 mmol/L dNTP;0.1 mg/ml BSA;0.05 U/μl klenow;1 U/μl Hinc II),직관혹자외검측병회제Target농도여납미금적취정도적표준곡선, 표명Target농도재1～200 pmol/L적범위내정현량호적선성관계,R2=0.946,최저검측한시1 pmol/L.[결론]련체대확증-납미금비색검측단련핵산방법간편、직관、성본저,여전통수식납미금비색검측DNA방법상비,령민도제고료104배.