棉花学报
棉花學報
면화학보
COTTON SCIENCE
2011年
6期
507-514
,共8页
陈天子%袁洪波%杨郁文%刘蔼民%张保龙
陳天子%袁洪波%楊鬱文%劉藹民%張保龍
진천자%원홍파%양욱문%류애민%장보룡
农杆菌%大丽轮枝菌%潮霉素%GFP%遗传转化%遗传稳定性%表型变异
農桿菌%大麗輪枝菌%潮黴素%GFP%遺傳轉化%遺傳穩定性%錶型變異
농간균%대려륜지균%조매소%GFP%유전전화%유전은정성%표형변이
为了揭示大丽轮枝菌的遗传变异和致病机理,以含潮霉素为抗性筛选标记、绿色荧光蛋白GFP为报告基因载体,优化了农杆菌介导转化大丽轮枝菌的遗传转化体系,获得了大丽轮枝菌菌株V991和BP2含绿色荧光蛋白GFP的转化子,转化率达到100×10-6～550×10-6.优化的转化条件为:农杆菌以IM液体培养基调节浓度至OD600=0.2并预培养4h,然后与等体积的浓度为106个·mL-1的大丽轮枝菌孢子混匀,每皿取200 μL混合液涂于固体IM共培养基的纤维素膜上,25℃共培养60h,转移至固体PDA培养基上以头孢噻肟钠500mg· LZ+潮霉素B 50 mg·L-1进行筛选.研究发现农杆菌LBA4404和AGL-1比农杆菌SK1044和EHA105更适用于大丽轮枝菌转化.对转化子观察和鉴定发现:从表型上,70.8％转化子保持野生型形态,29.2％转化子发生了形态变化；从致病力上,81％转化子的致病力相对于野生型没有发生显著变化,19％转化子的致病力或增强或减弱.
為瞭揭示大麗輪枝菌的遺傳變異和緻病機理,以含潮黴素為抗性篩選標記、綠色熒光蛋白GFP為報告基因載體,優化瞭農桿菌介導轉化大麗輪枝菌的遺傳轉化體繫,穫得瞭大麗輪枝菌菌株V991和BP2含綠色熒光蛋白GFP的轉化子,轉化率達到100×10-6～550×10-6.優化的轉化條件為:農桿菌以IM液體培養基調節濃度至OD600=0.2併預培養4h,然後與等體積的濃度為106箇·mL-1的大麗輪枝菌孢子混勻,每皿取200 μL混閤液塗于固體IM共培養基的纖維素膜上,25℃共培養60h,轉移至固體PDA培養基上以頭孢噻肟鈉500mg· LZ+潮黴素B 50 mg·L-1進行篩選.研究髮現農桿菌LBA4404和AGL-1比農桿菌SK1044和EHA105更適用于大麗輪枝菌轉化.對轉化子觀察和鑒定髮現:從錶型上,70.8％轉化子保持野生型形態,29.2％轉化子髮生瞭形態變化；從緻病力上,81％轉化子的緻病力相對于野生型沒有髮生顯著變化,19％轉化子的緻病力或增彊或減弱.
위료게시대려륜지균적유전변이화치병궤리,이함조매소위항성사선표기、록색형광단백GFP위보고기인재체,우화료농간균개도전화대려륜지균적유전전화체계,획득료대려륜지균균주V991화BP2함록색형광단백GFP적전화자,전화솔체도100×10-6～550×10-6.우화적전화조건위:농간균이IM액체배양기조절농도지OD600=0.2병예배양4h,연후여등체적적농도위106개·mL-1적대려륜지균포자혼균,매명취200 μL혼합액도우고체IM공배양기적섬유소막상,25℃공배양60h,전이지고체PDA배양기상이두포새우납500mg· LZ+조매소B 50 mg·L-1진행사선.연구발현농간균LBA4404화AGL-1비농간균SK1044화EHA105경괄용우대려륜지균전화.대전화자관찰화감정발현:종표형상,70.8％전화자보지야생형형태,29.2％전화자발생료형태변화；종치병력상,81％전화자적치병력상대우야생형몰유발생현저변화,19％전화자적치병력혹증강혹감약.
