CAJ | 학술논문

目的建立银染mRNA差异显示方法,为差异表达基因片断的分离克隆奠定基础. 方法采用随机引物和锚定引物各1条,建立差异显示反转录聚合酶链式反应(DDRT-PCR)和银染方法,对DDRT-PCR过程中各实验影响因素进行优化,割取差异条带进行二次扩增. 结果当总RNA用量为0.2 μg,引物浓度为0.6～1.0 μmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,MgCl2浓度为1.6～2.0 mmol/L时,同时起始5个循环的退火温度为50 ℃,扩增效率最佳,特异性好,背景干净. 结论 DDRT-PCR方法简便、快捷、灵敏、高效,可用于分离差异表达基因.
목적건립은염mRNA차이현시방법,위차이표체기인편단적분리극륭전정기출. 방법채용수궤인물화묘정인물각1조,건립차이현시반전록취합매련식반응(DDRT-PCR)화은염방법,대DDRT-PCR과정중각실험영향인소진행우화,할취차이조대진행이차확증. 결과당총RNA용량위0.2 μg,인물농도위0.6～1.0 μmol/L,dNTP농도위200 μmol/L,MgCl2농도위1.6～2.0 mmol/L시,동시기시5개순배적퇴화온도위50 ℃,확증효솔최가,특이성호,배경간정. 결론 DDRT-PCR방법간편、쾌첩、령민、고효,가용우분리차이표체기인.