郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2005年
3期
411-413
,共3页
张巧%赵国强%刘红梅%宫亚欧%丁兰萍%薛乐勋%杨胜利
張巧%趙國彊%劉紅梅%宮亞歐%丁蘭萍%薛樂勛%楊勝利
장교%조국강%류홍매%궁아구%정란평%설악훈%양성리
人端粒酶逆转录酶%原核表达载体%重组质粒
人耑粒酶逆轉錄酶%原覈錶達載體%重組質粒
인단립매역전록매%원핵표체재체%중조질립
目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达.方法:用RT-PCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoR I酶切位点的hTERT基因片段,与pGEM-T Easy连接,转化感受态大肠杆菌JMl09,经蓝-白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoR I酶切获取目的片段,并与EcoR I酶切过的pGEX-4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落.基因测序并用Omega 2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性.通过诱导pGEX-4T-1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Western blot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量.结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%.Western blot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%.结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达.
目的:構建人耑粒酶逆轉錄酶原覈錶達載體pGEX-4T-1-hTERT,併觀察融閤蛋白的錶達.方法:用RT-PCR方法從人肝癌組織中擴增齣帶有EcoR I酶切位點的hTERT基因片段,與pGEM-T Easy連接,轉化感受態大腸桿菌JMl09,經藍-白篩選、PCR擴增等篩選暘性菌落,用EcoR I酶切穫取目的片段,併與EcoR I酶切過的pGEX-4T-1質粒連接,重組子轉化BL21感受態大腸桿菌,PCR擴增篩選齣暘性菌落.基因測序併用Omega 2.0軟件比較分析重組質粒中hTERT基因片段與GenBank中的已知序列的同源性.通過誘導pGEX-4T-1融閤蛋白錶達,用抗hTERT多抗對融閤蛋白進行Western blot鑒定,薄層凝膠光密度掃描測定融閤蛋白錶達量.結果:PCR擴增等方法證實,人耑粒酶逆轉錄酶原覈錶達載體pGEX-4T-1-hTERT構建成功,其中hTERT基因片段與GenBank中相應基因同源性為98.73%,氨基痠序列同源性為99.68%.Western blot檢齣GST-hTERT融閤蛋白,其錶達量達28.4%.結論:成功構建瞭pGEX-4T-1-hTERT原覈重組質粒併穫得高度錶達.
목적:구건인단립매역전록매원핵표체재체pGEX-4T-1-hTERT,병관찰융합단백적표체.방법:용RT-PCR방법종인간암조직중확증출대유EcoR I매절위점적hTERT기인편단,여pGEM-T Easy련접,전화감수태대장간균JMl09,경람-백사선、PCR확증등사선양성균락,용EcoR I매절획취목적편단,병여EcoR I매절과적pGEX-4T-1질립련접,중조자전화BL21감수태대장간균,PCR확증사선출양성균락.기인측서병용Omega 2.0연건비교분석중조질립중hTERT기인편단여GenBank중적이지서렬적동원성.통과유도pGEX-4T-1융합단백표체,용항hTERT다항대융합단백진행Western blot감정,박층응효광밀도소묘측정융합단백표체량.결과:PCR확증등방법증실,인단립매역전록매원핵표체재체pGEX-4T-1-hTERT구건성공,기중hTERT기인편단여GenBank중상응기인동원성위98.73%,안기산서렬동원성위99.68%.Western blot검출GST-hTERT융합단백,기표체량체28.4%.결론:성공구건료pGEX-4T-1-hTERT원핵중조질립병획득고도표체.
