福建师范大学学报（自然科学版）
福建師範大學學報（自然科學版）
복건사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUJIAN TEACHERS UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION)
2007年
6期
97-101
,共5页
潘琴%王滔%陈骏扬%黄祖新
潘琴%王滔%陳駿颺%黃祖新
반금%왕도%진준양%황조신
A组乙型溶血性链球菌%DNaseB基因%亚克隆
A組乙型溶血性鏈毬菌%DNaseB基因%亞剋隆
A조을형용혈성련구균%DNaseB기인%아극륭
运用PCR扩增技术,以质粒pMD18-T-DNaseB为模板,扩增出0.5 kb截短的DNaseB基因,先将该基因片段与pMD19-T载体连接,确定该序列正确并进行大量繁殖后,再将DNaseB基因定向克隆入pET-28a(+)表达载体中,构建新的原核表达载体pET-28a(+)-DNaseB,转化该重组质粒至受体菌E.coliDH5a中,采用SDS碱裂解法提取该质粒DNA,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和核苷酸序列分析,证实插入的基因片段具有正确的DNaseB基因核苷酸序列,将pET-28a(+)-DNaseB转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经过IPTG诱导其目的蛋白得到了表达.
運用PCR擴增技術,以質粒pMD18-T-DNaseB為模闆,擴增齣0.5 kb截短的DNaseB基因,先將該基因片段與pMD19-T載體連接,確定該序列正確併進行大量繁殖後,再將DNaseB基因定嚮剋隆入pET-28a(+)錶達載體中,構建新的原覈錶達載體pET-28a(+)-DNaseB,轉化該重組質粒至受體菌E.coliDH5a中,採用SDS堿裂解法提取該質粒DNA,經EcoRⅠ和HindⅢ雙酶切鑒定和覈苷痠序列分析,證實插入的基因片段具有正確的DNaseB基因覈苷痠序列,將pET-28a(+)-DNaseB轉化至大腸桿菌BL21(DE3)中,經過IPTG誘導其目的蛋白得到瞭錶達.
운용PCR확증기술,이질립pMD18-T-DNaseB위모판,확증출0.5 kb절단적DNaseB기인,선장해기인편단여pMD19-T재체련접,학정해서렬정학병진행대량번식후,재장DNaseB기인정향극륭입pET-28a(+)표체재체중,구건신적원핵표체재체pET-28a(+)-DNaseB,전화해중조질립지수체균E.coliDH5a중,채용SDS감렬해법제취해질립DNA,경EcoRⅠ화HindⅢ쌍매절감정화핵감산서렬분석,증실삽입적기인편단구유정학적DNaseB기인핵감산서렬,장pET-28a(+)-DNaseB전화지대장간균BL21(DE3)중,경과IPTG유도기목적단백득도료표체.
