山西农业大学学报（自然科学版）
山西農業大學學報（自然科學版）
산서농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHANXI AGRICULTURAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
1期
60-63
,共4页
禽流感病毒%HA基因%克隆
禽流感病毒%HA基因%剋隆
금류감병독%HA기인%극륭
利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出禽流感病毒(H9亚型)血凝素的cDNA.通过T-A连接将已加A尾的PCR产物连接到线状克隆载体pGEM-Teasy vector,转化JM109感受态细胞,在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆.经PCR扩增,进一步确证为目的片段.对目的片段进行测序,结果获得该毒株的HA基因全长.与已知序列进行同源性比较,同源性最高的可达98%,表明这些分离株的亲缘关系较近;系统发育分析表明,该毒株属欧亚种系;通过血凝素裂解位点的氨基酸序列分析可知,该分离株的HA切割位点上未见到典型的高致病力毒株H5、H7所具有的一系列碱性氨基酸,其排列顺序为-PARSSRGLF-.所克隆的基因为禽流感病毒HA基因芯片的研究奠定了基础,同时为诊断和预防AI提供了理论依据.
利用反轉錄-聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)技術擴增齣禽流感病毒(H9亞型)血凝素的cDNA.通過T-A連接將已加A尾的PCR產物連接到線狀剋隆載體pGEM-Teasy vector,轉化JM109感受態細胞,在含氨芐青黴素的LB平闆上篩選暘性剋隆.經PCR擴增,進一步確證為目的片段.對目的片段進行測序,結果穫得該毒株的HA基因全長.與已知序列進行同源性比較,同源性最高的可達98%,錶明這些分離株的親緣關繫較近;繫統髮育分析錶明,該毒株屬歐亞種繫;通過血凝素裂解位點的氨基痠序列分析可知,該分離株的HA切割位點上未見到典型的高緻病力毒株H5、H7所具有的一繫列堿性氨基痠,其排列順序為-PARSSRGLF-.所剋隆的基因為禽流感病毒HA基因芯片的研究奠定瞭基礎,同時為診斷和預防AI提供瞭理論依據.
이용반전록-취합매련식반응(RT-PCR)기술확증출금류감병독(H9아형)혈응소적cDNA.통과T-A련접장이가A미적PCR산물련접도선상극륭재체pGEM-Teasy vector,전화JM109감수태세포,재함안변청매소적LB평판상사선양성극륭.경PCR확증,진일보학증위목적편단.대목적편단진행측서,결과획득해독주적HA기인전장.여이지서렬진행동원성비교,동원성최고적가체98%,표명저사분리주적친연관계교근;계통발육분석표명,해독주속구아충계;통과혈응소렬해위점적안기산서렬분석가지,해분리주적HA절할위점상미견도전형적고치병력독주H5、H7소구유적일계렬감성안기산,기배렬순서위-PARSSRGLF-.소극륭적기인위금류감병독HA기인심편적연구전정료기출,동시위진단화예방AI제공료이론의거.
