新基因MAGE-n表位肽与人HSP70融合基因的构建及表达纯化
신기인MAGE-n표위태여인HSP70융합기인적구건급표체순화
Construction, expression and purification of a fusion gene of MAGE-n peptide with human heat shock protein 70
  • 万方数据
    中国医药生物技术 중국의약생물기술
    CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
    2010年 4期 257-260 ,共4页

    张秀敏%史琪琪%李增山%叶菁%王军伟%林慧%曲萍%胡沛臻%隋延仿

    장수민%사기기%리증산%협정%왕군위%림혜%곡평%호패진%수연방

    HSP70热休克蛋白类%基因融合%癌症疫苗%MAGE-n%表位肽%原核表达 HSP70熱休剋蛋白類%基因融閤%癌癥疫苗%MAGE-n%錶位肽%原覈錶達
    HSP70열휴극단백류%기인융합%암증역묘%MAGE-n%표위태%원핵표체
    目的 构建MAGE-n159-167(QLVFGIEVV)表位肽与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因并表达纯化.方法 应用PCR方法,将QLVFGIEVV的cDNA序列融合到人HSP70基因的3'端,将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70;采用双酶切(SacⅠ、HindⅢ)及PCR鉴定后测序;转化大肠杆菌E.coli L21(DE3),用IPTG诱导表达,Ni Sepharose 6FF亲和填料进行分离纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果.结果 经PCR扩增成功获得约2.0 kb的目的片段,重组体经Sac 、HindⅢ双酶切分析及PCR结果与预期结果一致,测序正确.转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE分析得到71D左右的目的蛋白条带.用Ni Sepharose 6FF亲和填料分离纯化,获得了纯化的融合蛋白.结论 成功构建原核表达载体pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70,并获得纯化的融合蛋白,为基于MAGE-n的肿瘤疫苗研制提供良好的抗原奠定了实验基础.
    목적 구건MAGE-n159-167(QLVFGIEVV)표위태여인열휴극단백70(HSP70)적융합기인병표체순화.방법 응용PCR방법,장QLVFGIEVV적cDNA서렬융합도인HSP70기인적3'단,장융합기인극륭입원핵표체재체pET-28a(+)중,구건중조질립pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70;채용쌍매절(SacⅠ、HindⅢ)급PCR감정후측서;전화대장간균E.coli L21(DE3),용IPTG유도표체,Ni Sepharose 6FF친화전료진행분리순화,SDS-PAGE검측표체급순화결과.결과 경PCR확증성공획득약2.0 kb적목적편단,중조체경Sac 、HindⅢ쌍매절분석급PCR결과여예기결과일치,측서정학.전입중조질립적E.coli BL21(DE3)경IPTG유도、SDS-PAGE분석득도71D좌우적목적단백조대.용Ni Sepharose 6FF친화전료분리순화,획득료순화적융합단백.결론 성공구건원핵표체재체pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70,병획득순화적융합단백,위기우MAGE-n적종류역묘연제제공량호적항원전정료실험기출.
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