猪业科学
豬業科學
저업과학
SWINE INDUSTRY SCIENCE
2010年
11期
80-82
,共3页
王彬%汤德元%李春燕%曾智勇%王凤%甘振磊%周厚品
王彬%湯德元%李春燕%曾智勇%王鳳%甘振磊%週厚品
왕빈%탕덕원%리춘연%증지용%왕봉%감진뢰%주후품
长白猪%IL-4基因%真核表达载体%构建
長白豬%IL-4基因%真覈錶達載體%構建
장백저%IL-4기인%진핵표체재체%구건
将长白猪外周血淋巴细胞在刀豆素A(ConA)的刺激下培养24 h后,提取其总RNA,应用RT-PcR技术扩增白细胞介素-4(IL-4)cDNA,克隆到pMD19-T载体并测序.将构建好的载体双酶切并回收目的片段与pcDNA3.1(+)载体连接并转化入Top10中构建真核表达载体,真核表达载体经双酶切及测序结果表明:克隆的IL-4 cDNA全长为411个碱基,其中ORF为402个碱基,编码133个氨基酸,与GenBank公布的猪IL-4比对同源性为100%,从而证实成功构建了长白猪IL-4 cDNA真核表达载体.
將長白豬外週血淋巴細胞在刀豆素A(ConA)的刺激下培養24 h後,提取其總RNA,應用RT-PcR技術擴增白細胞介素-4(IL-4)cDNA,剋隆到pMD19-T載體併測序.將構建好的載體雙酶切併迴收目的片段與pcDNA3.1(+)載體連接併轉化入Top10中構建真覈錶達載體,真覈錶達載體經雙酶切及測序結果錶明:剋隆的IL-4 cDNA全長為411箇堿基,其中ORF為402箇堿基,編碼133箇氨基痠,與GenBank公佈的豬IL-4比對同源性為100%,從而證實成功構建瞭長白豬IL-4 cDNA真覈錶達載體.
장장백저외주혈림파세포재도두소A(ConA)적자격하배양24 h후,제취기총RNA,응용RT-PcR기술확증백세포개소-4(IL-4)cDNA,극륭도pMD19-T재체병측서.장구건호적재체쌍매절병회수목적편단여pcDNA3.1(+)재체련접병전화입Top10중구건진핵표체재체,진핵표체재체경쌍매절급측서결과표명:극륭적IL-4 cDNA전장위411개감기,기중ORF위402개감기,편마133개안기산,여GenBank공포적저IL-4비대동원성위100%,종이증실성공구건료장백저IL-4 cDNA진핵표체재체.
