现代食品科技
現代食品科技
현대식품과기
MODERN FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2010年
11期
1181-1184,1216
,共5页
汪芳%吴晖%李健兴%余以刚%李晓凤%袁琨%王少沛%唐语谦
汪芳%吳暉%李健興%餘以剛%李曉鳳%袁琨%王少沛%唐語謙
왕방%오휘%리건흥%여이강%리효봉%원곤%왕소패%당어겸
人α-防御素5前体蛋白%分泌表达%生物活性
人α-防禦素5前體蛋白%分泌錶達%生物活性
인α-방어소5전체단백%분비표체%생물활성
为了探索人α-防御素5(HD5)前体蛋白基因在酵母中高效分泌表达的可行性,将其对应基因克隆重组载体pPIC9K-preproHD5,经Sacl线性化后,转入Pichia pastoris GS115,得到重组毕赤酵母菌GS115/pPIC9K-preproHD5.应用PCR技术筛选高拷贝转化株,用BMGY培养GS115/pPIC9K-HD5至OD600为2～6时,用BMMY诱导培养120 h,离心取上清液,用Tricien-SDS-PAGE和蛋白定量试剂盒分析人α-防御素5前体蛋白的表达量.琼脂扩散法检测人α-防御素5前体蛋白的抑茵活性,发现其对金黄色葡萄球菌(ATCC6538)和大肠杆菌(ATCC10231)2种标准菌株具明显的抑菌活性.人α-防御素5前体基因可在毕赤酵母实现分泌型表达,该策略可能成为防御素工业化开发的有效途径.
為瞭探索人α-防禦素5(HD5)前體蛋白基因在酵母中高效分泌錶達的可行性,將其對應基因剋隆重組載體pPIC9K-preproHD5,經Sacl線性化後,轉入Pichia pastoris GS115,得到重組畢赤酵母菌GS115/pPIC9K-preproHD5.應用PCR技術篩選高拷貝轉化株,用BMGY培養GS115/pPIC9K-HD5至OD600為2～6時,用BMMY誘導培養120 h,離心取上清液,用Tricien-SDS-PAGE和蛋白定量試劑盒分析人α-防禦素5前體蛋白的錶達量.瓊脂擴散法檢測人α-防禦素5前體蛋白的抑茵活性,髮現其對金黃色葡萄毬菌(ATCC6538)和大腸桿菌(ATCC10231)2種標準菌株具明顯的抑菌活性.人α-防禦素5前體基因可在畢赤酵母實現分泌型錶達,該策略可能成為防禦素工業化開髮的有效途徑.
위료탐색인α-방어소5(HD5)전체단백기인재효모중고효분비표체적가행성,장기대응기인극륭중조재체pPIC9K-preproHD5,경Sacl선성화후,전입Pichia pastoris GS115,득도중조필적효모균GS115/pPIC9K-preproHD5.응용PCR기술사선고고패전화주,용BMGY배양GS115/pPIC9K-HD5지OD600위2～6시,용BMMY유도배양120 h,리심취상청액,용Tricien-SDS-PAGE화단백정량시제합분석인α-방어소5전체단백적표체량.경지확산법검측인α-방어소5전체단백적억인활성,발현기대금황색포도구균(ATCC6538)화대장간균(ATCC10231)2충표준균주구명현적억균활성.인α-방어소5전체기인가재필적효모실현분비형표체,해책략가능성위방어소공업화개발적유효도경.
