细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
12期
1123-1125,1129
,共4页
hRig-I%原核表达%抗体制备
hRig-I%原覈錶達%抗體製備
hRig-I%원핵표체%항체제비
目的:制备人维甲酸诱导基因I(hRig-I)N端CARD结构域(hRig-I-N)多克隆抗体.方法:从逆转录病毒载体MigRI-hRig-I中扩增hRig-I基因N端CARD结构域852 bp长度的基因片段,克隆入pGEX-4T3中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,表达GST-hRig-I-N融合蛋白,将表达的融合蛋白纯化,免疫家兔制备抗体,并以间接ELISA法测定抗体效价,以Western blot、细胞免疫荧光方法鉴定抗体的特异性.结果:在大肠杆菌中成功表达融合蛋白GST-hRig-I-N,ELISA法检测抗体的效价达到1:125 000,Western blot及细胞免疫荧光检测结果显示抗体可与原核及真核表达的hRig-I-N蛋白特异结合.结论:制备了高效价、高特异性的hRig-I-N抗体,为进一步研究hRig-I-N的功能奠定了基础.
目的:製備人維甲痠誘導基因I(hRig-I)N耑CARD結構域(hRig-I-N)多剋隆抗體.方法:從逆轉錄病毒載體MigRI-hRig-I中擴增hRig-I基因N耑CARD結構域852 bp長度的基因片段,剋隆入pGEX-4T3中,轉化大腸桿菌BL21(DE3),在IPTG誘導下,錶達GST-hRig-I-N融閤蛋白,將錶達的融閤蛋白純化,免疫傢兔製備抗體,併以間接ELISA法測定抗體效價,以Western blot、細胞免疫熒光方法鑒定抗體的特異性.結果:在大腸桿菌中成功錶達融閤蛋白GST-hRig-I-N,ELISA法檢測抗體的效價達到1:125 000,Western blot及細胞免疫熒光檢測結果顯示抗體可與原覈及真覈錶達的hRig-I-N蛋白特異結閤.結論:製備瞭高效價、高特異性的hRig-I-N抗體,為進一步研究hRig-I-N的功能奠定瞭基礎.
목적:제비인유갑산유도기인I(hRig-I)N단CARD결구역(hRig-I-N)다극륭항체.방법:종역전록병독재체MigRI-hRig-I중확증hRig-I기인N단CARD결구역852 bp장도적기인편단,극륭입pGEX-4T3중,전화대장간균BL21(DE3),재IPTG유도하,표체GST-hRig-I-N융합단백,장표체적융합단백순화,면역가토제비항체,병이간접ELISA법측정항체효개,이Western blot、세포면역형광방법감정항체적특이성.결과:재대장간균중성공표체융합단백GST-hRig-I-N,ELISA법검측항체적효개체도1:125 000,Western blot급세포면역형광검측결과현시항체가여원핵급진핵표체적hRig-I-N단백특이결합.결론:제비료고효개、고특이성적hRig-I-N항체,위진일보연구hRig-I-N적공능전정료기출.
