CAJ | 학술논문

依据CyanoBase提供的鱼腥藻PCC7120 furC基因(alr0957)的序列信息设计了一对特异性引物,用Touch-down PCR的方法从基因组DNA中扩增得到大小约450 bp的目的片段.通过TA克隆的方法将该片段连接到pMD18-T载体上筛选出重组质粒pMD18-T-fur.然后进行双酶切,纯化furC基因,再连接到原核表达载体pET-28a(+)上,转化表达菌株BL21 (DE3).经PCR、双酶切和测序鉴定,对阳性菌株进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组蛋白.结果表明:在25℃条件下经1 mmol/L IPTG诱导20 h,融合蛋白筱成功表达,其分子量约为19 000,为进一步纯化蛋白和对基因的调控功能方面研究奠定了基础.
의거CyanoBase제공적어성조PCC7120 furC기인(alr0957)적서렬신식설계료일대특이성인물,용Touch-down PCR적방법종기인조DNA중확증득도대소약450 bp적목적편단.통과TA극륭적방법장해편단련접도pMD18-T재체상사선출중조질립pMD18-T-fur.연후진행쌍매절,순화furC기인,재련접도원핵표체재체pET-28a(+)상,전화표체균주BL21 (DE3).경PCR、쌍매절화측서감정,대양성균주진행IPTG유도표체,SDS-PAGE검측중조단백.결과표명:재25℃조건하경1 mmol/L IPTG유도20 h,융합단백소성공표체,기분자량약위19 000,위진일보순화단백화대기인적조공공능방면연구전정료기출.